[发明专利]一种新的多肽——NADH脱氢酶9.46和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——NADH脱氢酶9.46，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

呼吸链NADH脱氢酶(也称辅酶Q氧化还原酶)，是一种寡聚酶的复合体，位于线粒体膜的内表面上，在叶绿体和蓝藻细菌中也有发现。整个NADH脱氢酶复合体包括25-30个多肽亚基，从NADH来的电子通过这个复合体传递到辅酶Q。

在哺乳动物的脱氢酶中有一个分子量为75Kd的多肽，是酶复合体中最大的一条亚基，是酶的铁硫(IP)位点的组成部分，它能结合两个4Fe-4S簇(N-3，N-4)。另外，还发现产酸杆菌依赖NAD的氢化酶的γ-亚基、大肠杆菌NADH-辅酶Q氧化还原酶的G亚基等也有这种75Kd的亚基结构，并且也能结合两个4Fe-4S簇。

这种75Kd的亚基有三个保守程度较高的区域，与铁硫蛋白的结合有关：(1)P-X(2)-C-[YWS]-X(7)-G-X-C-R-X-C；(2)C-P-X-C-[DE]-X-[GS](2)-X-C-X-L-Q；(3)R-C-[LIVM]-X-C-X-R-C-[LIVM]-X-[FY]。其中各有三个Cys残基，其上的巯基能与含铁硫原子的蛋白质结合，电子最初由NADH脱氢酶上的FMN辅基所接受，然后通过铁硫复合物传递给辅酶Q，铁能以氧化状态(Fe3+)或还原状态(Fe2+)存在，实际上就是电子的受体或供体。

在生物体中，呼吸代谢是一个重要的代谢过程，通过电子传递和氧化磷酸化作用最终生成ATP，从而满足细胞对能量的需要，而电子传递的第一个步骤就是通过NADH脱氢酶复合体来完成。在大脑中，某些毒素能使NADH脱氢酶产生缺陷，导致一些脑疾的产生，比较常见的疾病如帕金森(Parkinson)综合症，有些人在40岁之后就会产生这种症状，这是由于线粒体中NADH脱氢酶复合体功能的削弱；另外，低的NADH脱氢酶活性会引起亨延顿(Huntington)症。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与NADH脱氢酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为NADH脱氢酶9.46。

由于如上所述NADH脱氢酶9.46蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的NADH脱氢酶9.46蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新NADH脱氢酶9.46蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——NADH脱氢酶9.46以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码NADH脱氢酶9.46的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码NADH脱氢酶9.46的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产NADH脱氢酶9.46的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——NADH脱氢酶9.46的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——NADH脱氢酶9.46的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与NADH脱氢酶9.46异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中259-519位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-2542位的序列。