[发明专利]转录水平沉默的植物基因

权利要求书

1.具有式R_A-R_B-R_C的核酸，其中：

-R_A，R_B和R_C代表由独立地选自G、A、T、C组或G、A、U、C组的核苷酸残基组成的组分序列，其中：

G是鸟苷酸，

A是腺苷酸，

T是胸腺苷酸，

U是尿苷酸，

C是胞苷酸；

-R_A和R_C独立地由0～6000个核苷酸残基组成；

-R_B由至少50个核苷酸残基组成；并且

-组分序列R_B与以下比对组分序列至少有80％的同一性：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：27。

2.权利要求1的核酸，其中R_B由至少100个核苷酸残基组成，并与以下比对组分序列有至少85％的同一性：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ IDNO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：27。

3.权利要求1的核酸，其中R_B的核酸序列是SEQ ID NO：7、SEQ IDNO：9或SEQ ID NO：27中给出的序列。

4.权利要求1的核酸，其中R_A或R_C包含长度至少为50个核苷酸残基、与以下比对组分序列具有至少90％同一性的一个或多个额外组分序列：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：27。

5.权利要求1至4中任何一项的核酸，其包含编码含有至少200个氨基酸长、与SEQ ID NO：10比对组分序列至少85％相同的组分序列的蛋白质的开放阅读框。

6.选择相比于野生型植株而言转录水平基因沉默受损的植株的方法，该方法包括：

a)分别制备一系列植物的RNA；

b)用权利要求1所述的核酸探测这些RNA制品；并且

c)鉴定其RNA与所述核酸杂交的植株。

7.权利要求6的方法，其中步骤b)和c)包括用特异于SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：27的寡核苷酸引物，对所述RNA进行逆转录，并随后对所产生的DNA进行扩增。

8.代表细胞或植株中另一基因保持沉默所必需基因的至少部分的DNA的生产方法，包括：

(a)通过在其基因组中随机插入一段已知序列的DNA标签，对野生型细胞或者植株进行诱变；

(b)鉴定所述细胞或植株的突变体，该突变体表达在野生型细胞或植株中不表达的RNA；

(c)对DNA标签插入位点周围或附近的基因组DNA片段进行克隆；

(d)用(c)步得到的基因组DNA片段或其一部分对野生型细胞或植株的基因组文库进行筛选；

(e)鉴定包含有受到DNA标签插入影响的基因的至少一部分的克隆；并且

(f)用重组DNA技术对在(e)步得到的克隆进一步处理。

9.权利要求8的方法，其中植物通过T-DNA、Ac/Ds或EN/I插入，或其它物理或化学诱变法诱变。

10.权利要求8的方法，其中对表达不在野生型细胞或植株中表达之RNA的突变体的鉴定，是通过对所述的RNA进行逆转录，再对产生的DNA用特异于它的寡核苷酸引物扩增(RT-PCR)而进行的。

11.根据权利要求10的方法，其中突变体文库用RT-PCR分析。