[发明专利]转录激活抑制蛋白

说明书

                        技术领域

本发明涉及一种蛋白质，其具有与β-连环蛋白结合并抑制转录激活的活性，所述转录激活是由β-连环蛋白与属于TCF/Lef家族的蛋白质形成复合物而诱导的，本发明还涉及编码该蛋白质的DNA，识别该蛋白质的抗体，含有所述蛋白质或DNA的治疗剂，和含有所述抗体的诊断试剂。

                        背景技术

本文使用下列缩写：

AD：转录激活结构域

ADH：醇脱氢酶

APC：结肠腺癌(adenomatous poliposis coli)

BD：DNA-结合结构域

β-连环蛋白/TCF-4：β-连环蛋白和TCF-4的复合物

DCC：结直肠癌中的缺失

dhfr：二氢叶酸还原酶

DLG：Drosophila Discs Large

DMSO：二甲亚砜

EDTA：乙二胺四乙酸

ELISA：酶联免疫吸附试验

EST：表达序列标签

FAP：家族性结肠腺癌

FCS：胎牛血清

FITC：异硫氰酸荧光素

GST：谷胱甘肽S-转移酶

GST/ICAT：GST和ICAT的融合蛋白

GSK-3β：糖原合酶激酶-3β

ICAT：β-连环蛋白和TCF的抑制剂

IPTG：异丙基硫代半乳糖苷

KLH：匙孔血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin)

Lef：淋巴细胞增强子-结合因子

LTR：长末端重复序列

MBS：间-马来酰亚胺苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺

MEM：极限必需培养基

PCR：聚合酶链反应

PEG：聚乙二醇

RITC：异硫氰酸罗丹明

SDS：十二烷基硫酸钠

SDS-PAGE：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

TCF：T细胞因子

Tris：三(羟甲基)氨基甲烷

X-gal：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷

已分离到作为FAP致病基因的APC基因(Kinzler和Vogelstein，细胞，87，159(1996))。然而，据报道，不仅可在FAP中观察到APC基因异常，也可在70至80％的偶发性结肠癌病例中观察到APC基因异常。据认为，结肠癌的发生是由很多基因的连续突变引起的，所述基因包括K-ras，p53，DCC等，也包括APC。与其它基因相比，APC基因中的突变发生得最早，因此，据信APC基因的异常是结肠癌发生的主要事件。

为了阐明与APC基因异常相关的癌症发生机制，必须测定基因产物APC蛋白的功能。据报道，大小约为300kDa的APC蛋白与细胞中的β-连环蛋白，糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)以及DLG结合(Rubinfeld等，科学，262，1731(1993)；Su等，科学，262，1734(1993)；Rubinfeld等，科学，272，1023(1996)；Matsumine等，科学，272，1020(1996))。关于APC蛋白的功能，据报道，当在具有APC基因突变的结肠癌细胞系SW480中表达野生型APC蛋白时，β-连环蛋白的水平快速降低(Munemitsu等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92，3046(1995))。含有7个重复结构的中心区域是APC蛋白的功能所必需的，该区域与很多结肠癌病例中存在有突变的区域一致。另外，据报道在这些结肠癌细胞中，β-连环蛋白水平升高(Munemitsu等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92，3046(1995)；Rubinfeld等，癌症研究，57，4624(1997))。