[发明专利]来自TT病毒序列的肽和结合TT病毒的单特异性抗体

说明书

本发明涉及来自TT病毒基因组序列的肽和结合TT病毒的单特异性抗体。本发明还涉及本发明的肽或抗体分别用于药物。含有本发明的肽作为诊断抗原的诊断试剂盒和含有本发明的抗体作为诊断抗原的诊断试剂盒也包括在本发明之中。本发明的肽可用来免疫非人哺乳动物，以产生针对TT病毒的单特异性抗体。背景

1997年从患有输血后非甲-庚型肝炎的日本患者血清中发现了一种新的人传染源，命名为TT病毒(TTV)[1]。在47％暴发型非甲-庚型肝炎患者和46％未知病因的慢性肝病患者中检出了TTV DNA[2]，表明TTV可能为一些自发性肝病的病因。TTV在全球范围内存在[3]，似乎在感染血液传播病毒的高危人群中更为普遍[2]，如血友病病人和吸毒者中。然而，肠胃传播似乎也是可能的[2]。

TTV为无包膜单链DNA病毒，基因组至少为3.7kb[4]。它具有广泛的序列变异，可分为不同基因型和亚型[4]。在文献[4]中已讨论了它与细小病毒科的关系。随后分析表明了TTV的嗜肝性[2]，在一些非甲-庚型输血后肝炎和TTV DNA病毒血症患者中，TTV DNA滴度与氨基转移酶水平相关[1]。

然而，不能进一步证实TTV感染和严重肝病的联系[3，5，6]。TTV感染的流行病学、免疫学和临床重要性仍不明确。而且，至今仍没有TTV感染的血清学检测，目前PCR是唯一的诊断工具。

能够诊断TTV对人的感染并开发基于免疫肽和/或抗TTV抗体的药物是人们所希望的。

发明描述

本发明基于对应于最近描述的TT病毒(TTV；[1])基因组序列不同区域的合成肽。合成了对应于两个开放读码框(ORFs；Genebank登记号AB008394)1和2的总共80个重叠肽。用8份TTV感染的人血清样品和8份无TTV感染的人样品对它们进行分析。可反应性人血清样品均与具有序列SEQ ID NO：1：TATTTTYAYPGTNRPPV的肽反应。反应性可精确地作图到序列SEQ ID NO：2：YAYPGTNRPPV，发现其中PV残基为结合人抗体最必需的。

这样，本发明针对具有氨基酸序列SEQ ID NO：1TATTTTYAYPGTNRPPV的多肽，其中N-末端氨基酸TATTTT中的一到所有六个可以去除。

在本发明的一个实施方案中，本发明的肽具有氨基酸序列SEQ ID NO：2

YAYPGTNRPPV。

本发明也针对包含肽SEQ ID NO：1(TATTTTYAYPGTNRPPV，其中N-末端氨基酸TATTTT中的一到所有六个可以去除)和至少一个在表4中列出的具有氨基酸序列SEQ ID NO：3-11的其它肽的肽混合物。

本发明的肽和/或肽混合物中至少一个肽可以偶联到载体和/或标记上。载体的实例为塑料表面，如微量滴定板和珠子等；有机分子如生物素；蛋白如牛血清白蛋白；肽接头或多肽。可使用的标记实例(主要用于诊断目的)为放射性同位素、酶和荧光标记等。

此外，本发明的肽和/或肽混合物中至少一个肽可以被固定到固相上，如玻璃或塑料表面，主要用于诊断目的或纯化抗体。

本发明也涉及将本发明的肽或肽混合物可选地与其它生物活性或非活性成分偶联或组合，用作药物，如预防TT病毒感染的疫苗。

此外，本发明针对结合TT病毒的单特异性抗体。

在本发明的一个实施方案中，单特异性抗体结合选自氨基酸序列SEQID NO：1-11的氨基酸序列。

此外，本发明涉及根据本发明的单特异性抗体可选地与其它生物活性或非活性成分偶联或组合，用作药物，如给已经感染了TTV的患者施用的药物。

本发明还针对含有根据本发明的肽或肽混合物作为诊断抗原的诊断试剂盒。该试剂盒可用于免疫学分析如EIA、RIA等，来检测生物学体液(如血液或血浆)中抗TTV抗体的存在。

本发明还针对含有根据本发明的一个或多个单特异性抗体作为诊断抗体的诊断试剂盒。该试剂盒可用于免疫学分析如EIA、RIA等，来检测生物学体液(如血液或血浆)中抗TTV抗体的存在。

该诊断试剂盒通常包含进行免疫学分析的其它成分。这些其它成分将取决于使用的实际分析方法，通常包括阳性和阴性标准血清样品和使用说明书。

此外，本发明针对根据本发明的肽在免疫非人哺乳动物以产生针对TT病毒的单特异性抗体中的用途。

通过参考以下实验描述和本发明的具体实施方案，本发明将被进一步阐明。这些实验描述和具体实施方案不认为是对权利要求书中定义的本

发明范围的限制。实验描述