[发明专利]Acaciamangium的再生和遗传转化

权利要求书

1.一种再生Acacia mangium的方法，包括：

a)从外植体诱导愈伤组织形成；

b)培养所述愈伤组织以产生不定芽；

c)培养所述不定芽以伸长并产生羽状叶；和

d)培养c)步中伸长的芽，由此产生根及成为小植物。

2.权利要求1的方法，其中培养种子以产生所述外植体。

3.权利要求1的方法，其中所述外植体选自由下胚轴，子叶，叶，叶柄和茎组成的一组。

4.权利要求1的方法，其中所述外植体在包含MS培养基并补加生长素和细胞分裂素的培养基上培养。

5.权利要求4的方法，其中所述生长素为0.5-2.0mg/L，所述细胞分裂素为0.5-3.0mg/L。

6.权利要求4的方法，其中所述生长素选自2，4-D和α-萘乙酸，所述细胞分裂素选自激动素和6-苄基氨基嘌呤。

7.权利要求1的方法，其中所述愈伤组织在包含MS基本培养基并补加以下物质的培养基上培养，所述物质为：a)脱叶灵，b)吲哚乙酸，c)酪蛋白酶水解物，d)L-抗坏血酸，e)L-谷氨酰胺，f)L-天冬酰胺，g)L-脯氨酸，h)蔗糖和i)琼脂或phytagel。

8.权利要求1的方法，其中所述不定芽在包含补加以下物质的MS培养基的培养基上培养：a)脱叶灵，b)酪蛋白酶水解物，c)L-抗坏血酸，d)L-谷氨酰胺，e)L-天冬酰胺，f)L-脯氨酸，g)蔗糖和h)琼脂或phytagel。

9.权利要求1的方法，其中所述伸长的芽在包含1/2MS基本培养基并补加以下物质的培养基上培养，所述物质为：a)α-萘乙酸，b)激动素，c)酪蛋白酶水解物，d)L-抗坏血酸，e)L-谷氨酰胺，f)L-天冬酰胺，g)L-脯氨酸，h)蔗糖和i)phytagel。

10.权利要求1的方法，其中所述外植体已被转化。

11.一种再生Acacia mangium的方法，包括：

a)培养来自Acacia mangium树的辅助芽，以产生包含叶状柄的不定芽；

b)传代培养所述包含叶状柄的不定芽，以产生不定枝；

c)培养所述不定枝。

12.权利要求11的方法，其中所述辅助芽的培养是在包含MS基本培养基并补加以下物质的培养基上进行的，所述物质为：a)α-萘乙酸，b)6-苄基氨基嘌呤，c)酪蛋白酶水解物，d)L-抗坏血酸，e)L-谷氨酰胺，f)L-天冬酰胺，g)L-脯氨酸，h)蔗糖和i)phytagel或琼脂。

13.权利要求11的方法，其中所述包含叶状柄的不定芽的传代培养是在包含MS基本培养基并补加以下物质的培养基上进行的，所述物质为：a)6-苄基氨基嘌呤，b)酪蛋白酶水解物，c)L-抗坏血酸，d)L-谷氨酰胺，e)L-天冬酰胺，f)L-脯氨酸，g)蔗糖和h)phytagel或琼脂。

14.一种用感兴趣基因转化Acacia mangium的方法，包括如下步骤：

a)激活包含所述感兴趣基因的根癌农杆菌，以形成活化的根癌农杆菌；

b)预培养Acacia mangium的外植体，以产生预培养的外植体；

c)共培养所述活化的根癌农杆菌和所述预培养的外植体以产生感染的外植体；

d)培养所述感染的外植体以诱导愈伤组织和不定芽；及

e)在选择性培养基上培养所述愈伤组织或不定芽。

15.权利要求14的方法，其中所述外植体的预培养是在包含MS基本培养基并补加以下物质的培养基上进行的，所述物质为：a)脱叶灵，b)吲哚-3-乙酸，c)酪蛋白酶水解物，d)L-抗坏血酸，e)L-谷氨酰胺，f)L-天冬酰胺，g)L-脯氨酸，h)蔗糖和i)phytagel或琼脂。

16.权利要求14的方法，其中所述外植体在共培养之前在0.5M甘露糖醇中浸泡。