[发明专利]骨刺激因子

说明书

本申请要求申请日为1999年1月13日的美国专利申请No.09/229,304的优先权，后者是在先的美国专利申请No.09/048,058(申请日为1998年3月26日)的部分继续申请，这两个在先申请皆引入本文做参考。

本发明涉及能刺激骨生长的多肽。

对有关骨生长和强度的问题在过去的几年中有了进一步的理解。例如，在国际专利申请No.PCT/CA94/00144(1994年9月15日公开，公开号为94/20615)、国际专利申请No.PCT/CA96/00653(1997年4月3日公开，公开号为WO97/12036)、美国专利No.5320970和欧洲专利申请No.92302446(1992年9月23日公开，公开号为505210)中有这方面的概述。将这些申请的内容在此引入本文做参考。

下面描述本发明的背景。嗜中性粒细胞活化性肽(NAP-2；SEQ IDNO：1)和NAP-2的变体(在此称作“NAP-2V”(SEQ ID NO：2)为人们所知已有一段时间了(Walz，A.和M.Baggiolini，1989，生化与生物物理研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun.)，159：969)。英国专利No.2231872(英国专利2231872，发明人为M.Baggiolini，K.J.Clemetson和A.Walz，1990年6月14日公布)描述了NAP-2的氨基酸序列及3个显然天然存在的变体，包括NAP-2V。另外两个变体在NAP-2序列的N末端多出四个(SEQ ID NO：3)和三个(SEQ ID NO：4)氨基酸。NAP-2是β-血小板球蛋白(β-TG；SEQ ID NO：5)的亚序列，β-TG在N末端多出11个氨基酸，β-TG本身是结缔组织活化性肽(CTAP-III；SEQ ID NO：6)的亚序列，CTAP-III在N末端多出4个氨基酸，是血小板碱性蛋白(PBP；SEQ ID NO：7)的亚序列，PBP在N末端多出9个氨基酸。

NAP-2与白细胞介素-8(人IL-8；SEQ ID NO：8；猪IL-8 SEQ IDNO：9)和黑素瘤生长刺激活性(MGSA)一起，被指定为已知的α-趋化因子的亚家族。通常，在高度保守的位置，α-趋化因子彼此带有4个半胱氨酸残基，其内含分子的核心区，如Brandt等描述的那样(Ehlert，J.E.，F.Peterson，M.H.G.Kubbuta，J.Gerdes，H.D.Flad和E.Brandt，1995.生物化学杂志(J.Biol.Chem)270：6338)。Brandt等发现一个显然天然存在的C末端截短的NAP-2变体，其缺少了NAP-2的后面4个氨基酸，刺激嗜中性白细胞脱粒的效力增强。Brandt等还合成了缺少NAP-2的C末端最后1个、2个、3个、5个和6个氨基酸的变体。所有这些C端截短的多肽，效力比NAP-2适度增加，只具有NAP-2前面64个氨基酸的序列除外。对于NAP-2的结构及其功能，Brandt等对序列修饰的可能意义进行了讨论。

血小板因子4(PF4；SEQ ID NO：10)为一70个氨基酸的多肽(Hermodson，M.，G.Schmer和K.Kurachi，1977，生物化学杂志(J.Biol.Chem)，252：6276；Morgan，F.J.，G.S.Begg，C.N.Chesterman，1979，Tromb.Haemost.42：1652)。PF4表现出对两种成骨骨肉瘤细胞系增生的抑制，这两种细胞系为Saos-2和G-292(美国专利号为No.5304542，发明人：D.M.Takakis，1994年4月19日出版)。吲哚美辛明显地不影响由PF4诱导的对细胞增生的抑制。特定片断PF4(58-70)、PF4(47-70)以及单体低亲合力PF4(LAPF4)也被认为是有作用的，LAPF4与PF4有50％的同源性并包含α螺旋的C末端。因此，在抑制成骨细胞增生的方法中，PF4和这些有关的多肽是有用的，尤其是用于患骨质疏松症的人。

NAP-2V的前70个氨基酸与PF4的序列有大约51％的同源性，4个半胱氨酸的位置在两个多肽中是保守的。