[发明专利]一种新的多肽——二甲丙烯基二磷酸异构酶11.99和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——二甲丙烯基二磷酸异构酶11.99，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

人类早幼粒细胞白血病细胞株HL60有分化成各种不同成熟细胞型的潜能，这些细胞包括单核细胞/巨噬细胞、嗜中性白细胞，嗜酸性白细胞和嗜碱性白细胞[Collins，S.J.1987.Blood 70：1233-1244]。用佛波脂TPA处理HL60细胞，HL60细胞则会表现出各种分化特征。这些特征包括噬菌体细胞活性和趋化现象活动，特征性表面分化标记以及通过所谓的“突发性呼吸”途径产生的超氧化合物[Babior，B.M.1978.N..Engl.J.Med.298：659-668]。类异戊二烯的代谢是刺激HL60细胞突发性呼吸作用产生超氧化合物所必须的，而该超氧化合物又是嗜中性白细胞的抗菌特性所必须的[Bokoch，G.M.，andProssnitz，V.1992.J.Clin.Invest.89：402-408]。类异戊二烯二磷酸：二甲丙烯基二磷酸(IPP：DMAPP)异构酶在类异戊二烯的合成过程中起着非常重要的作用。该酶催化IPP和DMAPP的中间转换，DMAPP是一种强去离子剂并且是接下来的异戊二烯转移反应所必须的[Anderson，M.S.，Muehlbacher，M.，Street，I.P.，Proffitt，J.，andPoulter，C.D.1989.J.Biol.Chem.26：19169-19175]。

二甲丙烯基二磷酸异构酶的活性位点是位于139位的半胱氨酸[Reardon，J.E.，and Abels，R.H.1986.Biochemistry25：5609-3306]。底物印迹实验证明这个硫醇基团是二甲丙烯基二磷酸异构酶的结合结构域。二甲丙烯基二磷酸异构酶中另一个具有催化活性的重要基团是谷氨酸207。分别位于半胱氨酸和谷氨酸两边的四个连接氨基酸同样也是保守的。在酶的C末端存在两个聚腺甘酸信号序列。

类异戊二烯的生物合成过程产生一系列广泛的有重要功能的分子[Sinensky，M.，and Lutz，

R.J.1992.BioEssays14：25-31]。一个异戊二烯化蛋白，ras p21在细胞分化肿瘤形成和肿瘤转移中起重要的调节作用[Downward，J.1992.BioEssays14：177-181]。其他产物还包括甾醇、胡萝卜素、甘油、乙醚、呼吸链复合酶和聚异戊二烯二磷酸[Poulter，C.D.，andRilling，HC.1981.

Prenyl transferase and isomerase.Vol.1，pp.161-209，Wiley，NewYork]。二甲丙烯基二磷酸异构酶在类异戊二烯的生物合成途径中起着非常重要的作用。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与二甲丙烯基二磷酸异构酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为二甲丙烯基二磷酸异构酶11.99。

由于如上所述二甲丙烯基二磷酸异构酶11.99蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的二甲丙烯基二磷酸异构酶11.99蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新二甲丙烯基二磷酸异构酶11.99蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——二甲丙烯基二磷酸异构酶11.99以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码二甲丙烯基二磷酸异构酶11.99的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码二甲丙烯基二磷酸异构酶11.99的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产二甲丙烯基二磷酸异构酶11.99的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——二甲丙烯基二磷酸异构酶11.99的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——二甲丙烯基二磷酸异构酶11.99的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与二甲丙烯基二磷酸异构酶11.99异常相关的疾病的方法。