[发明专利]一种新的多肽——人锌指蛋白11和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人锌指蛋白1，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

真核基因的转录调控对于基因的正常表达及发挥生物学功能是十分重要的，通常由转录调控因子来完成这一过程。转录调控因子在生物体内参与决定基因在何种组织及何种发育阶段开始转录，编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常的进行转录与表达。转录因子对基因表达的调控主要通过转录因子与特定的DNA序列结合、转录因子间的相互作用及转录因子与常规转录机构的相互作用在完成。根据结构基序的不同，已知的DNA结合蛋白可主要分为两类：含有螺旋-转角-螺旋基序的蛋白及锌指蛋白[Kamal Chowdhury，Heidi Rohdewohld et al.，Nucleic AcidsResearch，1988，16：9995-10011]。

锌指蛋白是一种DNA结合蛋白，最早在非洲爪蟾RNA聚合酶III介导的5S rRNA基因转录因子TF III A蛋白的氨基酸序列中发现。此后发现锌指蛋白在不同生物的各种组织中均有表达，这些组织包括造血细胞、脑、神经系统、表皮组织、各种与分泌吸收相关的组织及与肿瘤和无限增殖细胞系相关的组织等。据估计在人类基因组上锌指蛋白基因超过了1％(Bellefroid et al.，1989；Pellegrino andBerg，1991)。锌指蛋白的锌指结构主要有以下几种：C2H2构型、C2C2构型、C2HC构型、C2HC4C构型、C3H构型、C3HC4构型(Dai KS et al.，1998)。其中含C2H2构型的锌指蛋白基因构成人类基因组最大的一族基因(Berker et al.，1995)。锌指蛋白的C2H2构型如下：

典型的锌指结构在长度上大约由28个氨基酸残基构成，为Cys-Cys……His-His排列，锌指单元包含有一段相对保守的序列：Cys-X_2-4-Cys-X₃-Phe-X₅-Leu-X₂-His-X_2-4-His(Bray，p.et al.，1993)。锌指结构中两个保守的Cys参与组成一个反向平行的β折叠，两个保守的His参与组成α螺旋，这两个结构与核心的Zn原子结合形成一个紧密的球形区域(Pabo，C.A.andSauer，R.T，1992)。此类锌指蛋白往往具有1个到100个锌指结构(Rhodes，D.andKlug，1993)。除了保守的锌指结构，连接两个相邻的Kruppel的C2H2构型锌指蛋白常常但不总是包含保守的特异性氨基酸序列TGEKP(Bray，p.etal.，1993)。在锌指蛋白中，Zn的作用是使蛋白质分子形成指型构象的骨架与DNA结合。

锌指结构在许多与“蛋白-核酸”和“蛋白-蛋白”相互作用有关的蛋白里都有发现。锌指蛋白可以与双链DNA(dsDNA)或单链RNA结合，执行着许多重要作用，其最重要的功能涉及基因的转录调控，并可能同时有信号传递因子的作用(EMBO J.12：1363-1374，1993)。现有的研究表明，C2H2类型的锌指结构域在发育调控中起关键作用。例如，在Drosopila Kruppel(Rosenberg，1986)和hunchback(Tautz，1987)锌指蛋白中，此结构域与胚胎模式形成有关；在鼠Krox-20锌指蛋白中，此结构域与后脑模式形成及细胞增殖控制有关(Chavrier，1988；Wilkinson，1989)，GL13在常染色体显性发育异常Greig综合症中(vortkamp，1991)中；有些锌指蛋白基因与肿瘤形成有关，如WT1在Wilm’s肿瘤及先天性生殖尿道发育中(Haber，1990)。

经研究发现，人锌指蛋白131-140，142，143，148，151，154，155都属于人锌指蛋白Kruppel基因家族，并从人胰岛瘤细胞cDNA中分离得到(Tommerup andVissing，Genomics 27：259-264，1995)。人锌指蛋白138，139，143分别与Williams综合症、裂手裂脚症、贝魏二氏综合症有关；人锌指蛋白132，134，135，137，154，155均可引起实体瘤如甲状腺腺瘤；人锌指蛋白151与成神经细胞瘤、结肠癌、乳腺癌或其它肿瘤密切相关；人锌指蛋白139，148，151可引起血液性恶性疾病如白血病、非何杰金氏淋巴瘤(Genomics 27：259-264，1995)。