[发明专利]一种新的多肽——人剪切蛋白9.9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人剪切蛋白9.9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

因的前体mRNA产物一般缺乏生物活性，需要经过剪切加工之后才成为有活性的RNA。绝大多数真核基因的结构基因均含有插入序列，所谓基因不连续性，因此转录产物需要经过剪切等过程出去内含子序列。

剪切过程是将内含子从前体mRNA中去除的过程。这一过程是通过两步磷酰基转移反应完成的。在第一步中，5’外显子从被切开，形成一个套索状的中间体。在第二步中，3’剪切位点被切开，外显子连接在一起，内含子被释放。这一过程是由一类称为剪切子的多组分酶所催化的。

酵母中有四种蛋白(Prp16p，Prp17p，Prp18p，和Slu7p)在剪切的第二步中是必须的。PRP16，PRP17，和PRP18的突变会引起剪切中间产物的聚集。PRP17的N端的突变是致死的。with Prp18p，Prp16p，和U5 snRNA可能通过N端与PRP17相互作用。【Genetics 1996 May；143(1)：45-55】

在人类中也找到了PRP17的人PRP17蛋白，与酵母的PRP17有36％的相似性。同时也找到了其他的3个人PRP17蛋白。这说明剪切过程的第二步是相当保守的过程。【EMBO J 1998 Apr 1；17(7)：2095-106】

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人剪切蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人剪切蛋白9.9。

由于如上所述人剪切蛋白9.9蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人剪切蛋白9.9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人剪切蛋白9.9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人剪切蛋白9.9以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人剪切蛋白9.9的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人剪切蛋白9.9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人剪切蛋白9.9的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人剪切蛋白9.9的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人剪切蛋白9.9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人剪切蛋白9.9异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中1812-2084位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-2310位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人剪切蛋白9.9蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。

本发明还涉及一种体外检测与人剪切蛋白9.9蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本发明多肽的量或生物活性。