[发明专利]一种新的多肽——视网膜杆状钠－钙+钾离子交换器11.33和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——视网膜杆状钠-钙+钾离子交换器11.33，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

体内存在两种钠/钙离子交换器，一种存在于心脏、骨骼肌肉和脑中，它能够将一个Ca2+与三个Na+进行交换；另一种存在于视网膜光感受细胞中，能够将一个Ca2+和一个K+与四个Na+进行交换。视网膜杆状钠-钙+钾交换器(NCKX1)是一种独特的钙输出蛋白，属于跨膜蛋白，它只存在于视网膜杆状光感受器的外面部分片段上。在光感应过程中，NCKX1主要负责将钙离子从细胞内挤出。目前已经分别从人类和牛等动物的视网膜中得到了NCKX1的cDNA，发现NCKX1蛋白在动物体内有较高的保守性。编码人类NCKX1的基因位于染色体15q22上(Tucker JE，Winkfein RJ et al.，1998)。

人类视网膜杆状钠-钙+钾交换器cDNA编码一条含有1081个氨基酸残基的蛋白，在氨基酸水平上完整的NCKX1蛋白序列与牛的NCKX1全序列相比较有64.3％的相同性。两段推定的跨膜分布区域和它们的短连接环显示出高度的保守性，氨基酸相同性为94％-95％，而位于N末端的细胞外环保守程度较低，只显示59％的相同性。将巨大的跨膜区域分割成两半的巨大的细胞质环包含了两个大的删除部分，第一个删除部分包含18个氨基酸，而第二个删除部分包含一系列重复序列，在牛的该区域中主要以酸性氨基酸为主，但是在人类该区域中却没有观察得到(Tucker JE，Winkfein RJ et al.，1998)。

实验证明，将NCKX1的N末端65个氨基酸删除将形成一种不完整的产物，它不影响整条蛋白在膜上的定位，但是N末端疏水性区域不能转位。因此可见，NCKX1的N末端65个氨基酸构成了一条非断裂的信号序列，对于高效的膜靶位点的定位和NCKX1的正常的膜完整性的保持非常重要(McKiernan CJ，Friedlander M，1999)。NCKX2的主要的细胞质环高亲和力Ca2+结合区域可以调节视网膜蛋白对于Ca2+的结合活性，并且影响其对于K+的敏感性(Seiler EP，Guerini D et al.，2000)。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与视网膜杆状钠-钙+钾离子交换器的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为视网膜杆状钠-钙+钾离子交换器11.33。

由于如上所述视网膜杆状钠-钙+钾离子交换器11.33蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的视网膜杆状钠-钙+钾离子交换器11.33蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新视网膜杆状钠-钙+钾离子交换器11.33蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——视网膜杆状钠-钙+钾离子交换器11.33以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码视网膜杆状钠-钙+钾离子交换器11.33的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码视网膜杆状钠-钙+钾离子交换器11.33的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产视网膜杆状钠-钙+钾离子交换器11.33的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——视网膜杆状钠-钙+钾离子交换器11.33的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——视网膜杆状钠-钙+钾离子交换器11.33的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与视网膜杆状钠-钙+钾离子交换器11.33异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：