[发明专利]一种新的多肽——人液泡质子－腺苷三磷酸酶C亚基9.46和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基9.46，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

本发明从人胎脑中克隆出编码人V-ATPase C亚基的基因，该基因长度为1665碱基，有二个正向阅读框，阅读框的起始位置是344，终止位置在1489，共编码381个氨基酸。人V-ATPase C亚基的等电点为pI6.3，与人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基和牛人液泡氢离子-腺苷三磷酸酶C亚基都有62％的同源性。故命名为人V-ATPase C亚基。

已知，人氢离子-腺苷三磷酸酶能将离子/质子“泵入”细胞内的细胞器中或使离子/质子跨越某些细胞(如：破骨细胞、肾间质细胞)的质膜。人氢离子-腺苷三磷酸酶的催化部位是由3个A亚基和3个B亚基构成的六聚体，具有结合和水解ATP的作用；而另有3个亚基C、D、和E具有调节作用。人氢离子-腺苷三磷酸酶的主要功能是在细胞内调节局部区域的酸碱度，在受体介导的胞饮作用、胞内膜流、蛋白降解及偶联转运中起重要作用。故人氢离子-腺苷三磷酸酶具有肾脏酸化作用、骨重吸收作用和稳定细胞内pH值等作用。可见，人V-ATPaseC亚基作为3个调节亚基之一，具有调节人氢离子-腺苷三磷酸酶活性在作用。通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基9.46。

由于如上所述人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基9.46蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基9.46蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基9.46蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基9.46以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基9.46的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基9.46的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基9.46的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基9.46的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基9.46的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基9.46异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中574-834位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1243位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基9.46蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。