[发明专利]一种新的多肽——人结合蛋白RanBP67.43和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人结合蛋白RanBP67.43，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

RanBP蛋白是一些巨大的核孔蛋白，它们主要功能是结合Ran/TC4蛋白。Ran/TC4蛋白是一种小的核G蛋白，能够与染色质束缚的鸟苷酸核苷释放因子RCC1形成混合物。RCC1的缺失引起细胞周期、RNA输送和核蛋白进出等过程的异常变更。Ran/TC4的超表达能够遏制上述某些细胞过程的进行，表明Ran/TC4的功能是在RCC1功能发挥的之后才发生。

通过双杂交筛选的方法能够得到与Ran/TC4结合的蛋白，RanBP2蛋白就是其中之一，它包含有3224个氨基酸残基，是一个非常巨大的蛋白。Ran/BP2的氨基末端包含了一个含有7个Leu的Leu富含区域、四个与RanBP1同源的区域、八个与NUP153相似的锌指结构区域，其羧基末端与亲环蛋白有高度的同源性。RanBP2包含了XFXFG的五肽结构域，具有核孔蛋白混合物(nuclear pore complex，NPC)的典型特征，这就表明了RanBP2是NPC的成员之一。并且，NLS介导的核输送能够被一种直接与RanBP2结合的抗体抑制，表明了RanBP2在NPC中起着非常重要的物质运输功能。在Leu富含区域，有7个连续出现的Leu，构成一段Leu拉链(Leucine zipper region)，位于第450-471位置上。RanBP2的锌指重复结构与NUPl53相同源。

Ran/BP2位于NPC上，对于核的物质运输是必不可少的。通过免疫沉淀实验，发现Ran/TC4-GTP结合RanBP2，并与一个抗RanBP2的抗体结合。RanBP2的序列上有四个区域与RanBP1高度同源，将每个区域单独在大肠杆菌中表达，发现四个区域与Ran/TC4-GTP都能发生特异性结合，因而无论在功能上还是在序列相同性上它们都是Ran结合区域(RanBD)。在体内，这些RanBD可能协同起作用。RanBP2有26拷贝退化的XFXFG区域，可以作为是否是NPC蛋白的判断依据。用Mab350进行免疫沉淀，发现RanBP2是核孔蛋白中最大的一种。

1997年，Dirk等人又从人中克隆得到了两个新的RanGTP结合蛋白---RanBP7及RanBP8。这两个蛋白与上述RanBP2蛋白具有相似的结构及功能特征，其亦在细胞周期和RNA及核蛋白的运输过程中发挥重要的调控作用[Dirk Gorlich，Marylena Dabrowskiet al.，1997，J Cell Biol，138(1)：65-80]。该蛋白的突变或表达异常将导致体内相关细胞周期途径的异常，进而引发各种相关的代谢及发育紊乱性疾病。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与人结合蛋白RanBP的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人结合蛋白RanBP67.43。

由于如上所述人结合蛋白RanBP67.43蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人结合蛋白RanBP67.43蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人结合蛋白RanBP67.43蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人结合蛋白RanBP67.43以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人结合蛋白RanBP67.43的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人结合蛋白RanBP67.43的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人结合蛋白RanBP67.43的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人结合蛋白RanBP67.43的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人结合蛋白RanBP67.43的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人结合蛋白RanBP67.43异常相关的疾病的方法。