[发明专利]一种新的多肽——人泛素结合酶10.01和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人泛素结合酶10.01，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

沿着周期时段依次有条不紊地发生，特定的蛋白在特定的时间出现并起着相应的调控作用。为达到这一目的，细胞通常通过以下途径来解决：第一，修饰现有的蛋白(如磷酸化与去磷酸化)；第二，合成新的蛋白(如cyclin的周期依赖合成)；第三，水解多余的蛋白(如cyclin的周期依赖降解)。与周期相关的蛋白水解通路必需时底物特异的通路。人们发现泛素-蛋白酶水解系统在细胞周期调控中起着十分重要的调节作用。

泛素系统是生物体内广泛存在的一个重要的调控途径，其涉及体内各种相关蛋白的选择性降解过程。蛋白的泛素化过程主要涉及三个蛋白酶家族的共同作用：泛素活化酶E1蛋白酶家族、泛素结合酶E2蛋白酶家族及泛素蛋白连接酶3蛋白酶家族。其中，E3可能直接参与泛素的最终转移及蛋白的泛素化过程。首先，泛素蛋白的COOH末端与泛素活化酶E1形成硫酯键而被活化，然后被转移给E2或泛素结合酶家族的一员，最后直接或通过泛素-蛋白连接酶E3把泛素转到目标蛋白的赖氨酸残基上。E3为在底物上形成多泛素链所必需的，这一步骤便于26S大小的蛋白酶体有效地识别底物，并促进蛋白的泛素化及降解过程的发生。

E6-AP蛋白是一种细胞内蛋白，约100kDa大小。该蛋白在生物体内与人16型及18型乳头状瘤病毒原癌基因E6蛋白相互作用，两者的复合物再与p53蛋白相作用，以介导泛素活性酶E1和泛素结合酶E2的作用活性及p53蛋白的泛素过程。人们已从多种动物体内克隆得到了多种泛素结合酶家族的成员，并对这些蛋白的结构及功能进行了详细的研究。1996年，Ulrike等人又从人中克隆得到了两个新的泛素结合酶E2蛋白家族的成员。这两个蛋白亦与该蛋白家族的其它成员相似，在生物体内参与调控多种细胞周期相关的蛋白的水解途径，以促进相关细胞周期的正常进行。该蛋白的突变或表达异常将直接影响代谢途径的异常，进而引发各种相关的疾病[Ulrike Nuber，Sylvia Schwarz et al.，1996，J BiolChem，271(5)：2795-2800]。

由上可知，泛素结合蛋白是生物体内泛素调控系统的一个重要的组成成分，其与其它泛素系统的酶类协同作用以调控相关的细胞周期过程的正常进行。该蛋白家族成员的突变或表达异常将导致相关代谢途径的蛋白的表达异常，进而引发各种相关的疾病。该蛋白在生物体内通常与各种细胞周期异常相关的代谢及发育紊乱性疾病、相关组织的肿瘤及癌症等疾病的发生密切相关。其还可用于诊断及治疗上述各种相关的疾病。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人泛素结合酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人泛素结合酶10.01。

由于如上所述人泛素结合酶10.01蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人泛素结合酶10.01蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人泛素结合酶10.01蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人泛素结合酶10.01以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人泛素结合酶10.01的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人泛素结合酶10.01的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人泛素结合酶10.01的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人泛素结合酶10.01的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人泛素结合酶10.01的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人泛素结合酶10.01异常相关的疾病的方法。