[发明专利]一种新的多肽——钴胺素结合蛋白36和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--钴胺素结合蛋白36，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在真核细胞中，许多蛋白与结合并转运钴胺素(Cb1，维生素B12)有关，已知其中有四种钴胺素结合蛋白在高等动物包括人类中表达：(1)内在因子(IF)，一个分子量为48KDa的糖蛋白，在多数动物的胃和胰腺中存在。IF能通过特定的受体介导的细胞内吞作用形成IF-Cb1复合物，从而促进Cb1在回肠中的吸收。(2)钴胺传递蛋白Ⅰ(TCⅠ)，也叫R-结合蛋白，TCⅠ把Cb1从血液运输到细胞。(3)钴胺传递蛋白Ⅱ(TCⅡ)，一个由人脐静脉内皮细胞(HUVE)分泌的分子量为38-43Kda的血浆蛋白，TCⅡ易化运输Cb1的细胞摄入，另外，TCⅡ也介导Cb1在回肠中的运输。(4)结合钴啉蛋白(HC)，一个分子量为66Kda的糖蛋白，存在于大部分分泌液中。HC一般和钴胺素或钴胺素衍生物如钴啉醇酰胺结合，它的确切功能目前还不十分清楚，可能是阻止一些由细菌产生的钴胺素类似物的吸收。

虽然上述四种蛋白都与钴胺素结合，但Cb1的细胞摄入却由不同的受体介导。这些蛋白，尤其是IF和TCⅡ的重要生理功能体现在，当这两种蛋白分泌减少时，将导致Cb1的缺乏，最后引起巨成红细胞贫血和神经系统紊乱。

这些蛋白是由400个氨基酸组成的多肽，它们有许多区域极为相似，这个保守区域的特征模式为：[SN]-V-D-T-[GA]-A-[LIVM]-A-X-L-A-[LIVMF]-T-C，这些保守区域对Cb1的结合可能是必不可少的，但是，TCⅠ、TCⅡ和IF对Cb1和Cb1类似物的亲和力差异显示，这些蛋白在配体结合点的结构不同极可能导致一个共同远祖基因的分歧。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与钴胺素结合蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为钴胺素结合蛋白36。

由于如上所述钴胺素结合蛋白36蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的钴胺素结合蛋白36蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新钻胺素结合蛋白36蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--钴胺素结合蛋白36以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码钴胺素结合蛋白36的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码钴胺素结合蛋白36的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产钴胺素结合蛋白36的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--钴胺素结合蛋白36的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--钴胺素结合蛋白36的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与钴胺素结合蛋白36异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中313-1302位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2600位的序列。