[发明专利]一种新的多肽——层粘连蛋白19和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——层粘连蛋白19，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

层粘连蛋白参与很多的生物学活动，例如细胞连接，有丝分裂发生，细胞转移以及细胞分化。

层粘连蛋白始基底膜的非胶原组成成分[Timpl,R.,Rohde,H.,Robey,.G.,etal.,1979,J.Biol.Chem.254,9

933-9937][Hogan,B.L.M.,Barlow,D.P.,and Kurkinen,M.1984,108,60-69,Pitman Books Ltd.,London]。该分子由3条不同的链组成，A,B1和B2，它们通过二硫键彼此连接[Cooper,A.R.,Kurkinen,M.,Taylor,A.,and Hogan,B.L.M.1981,Eur.j.Biochem.119,189-197]。层粘连蛋白大分子的3个短臂和1个长臂组成一个不对称的十字架结构。每一个短臂又包含两个小球结构，长臂的末端则有1个大球。电镜观察表明每一条链的N末端形成一条短臂，每一条链的C末端则形成一个转角结构，A链凸进长臂的大球结构内部[Timpl,R.,and Dziadek,M.1986,Int.Rev.Exp.Pathol.29,1-112]。B1链是一个包含一条21个氨基酸残基信号肽由1786个氨基酸残基组成的多结构域多肽。在C末端由夹杂着一个短的富含半胱氨酸结构域α的转角结构域Ⅰ和转角结构域Ⅱ组成。结构域Ⅲ和Ⅴ也包含几个相似的富含半胱氨酸重复子。序列分析表明B1链和B2链是两个同源蛋白，它们由相似的多结构域二级结构，这些二级结构包括富含半胱氨酸重复子，球状结构域和转角区域。

B2链有1576个氨基酸残基，比B1链少189个氨基酸残基，这些少的氨基酸残基主要位于链的C末端而形成长臂的转角结构[Sasaki,M.,Kato,S.,Kohno,K.,Martin,G.R.,and Yamada,Y.1987,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84,935-939]。B1链的结构域α以及包含6个半胱氨酸的唯一的33个氨基酸残基序列在B2链中没有相对应的结构，而B1链中被结构域α分离的结构域Ⅰ和结构域Ⅱ在B2链中却是连续的。B2链也包含典型的盘绕卷曲结构的六花瓣重复子，这些重复子有几乎一样的长度，并且可能和A链形成转角结构。结构域Ⅲ和Ⅴ由几个富含半胱氨酸类型A同系物拷贝组成。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本发明的多肽的表达谱与层粘连蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为层粘连蛋白19。

由于如上所述层粘连蛋白19蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的层粘连蛋白19蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新层粘连蛋白19蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——层粘连蛋白19以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码层粘连蛋白19的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码层粘连蛋白19的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产层粘连蛋白19的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——层粘连蛋白19的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——层粘连蛋白19的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与层粘连蛋白19异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：