[发明专利]一种人基因表达调节因子相关蛋白及其编码序列

说明书

本发明涉及分子生物学、酶学、生理学以及基因工程等领域。具体地，本发明涉及一种在人类造血干细胞中表达的hNIF3-s蛋白及其核酸序列。本发明还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。

受半乳糖基因GAL4调节的转录过程在葡萄糖培养基中受到抑制，NGG1基因在这过程中必不可少。实验证明NGG1抑制了GAL启动子的功能。(EMBO J 1993 Dec15；12(13)：5255-65)。(J Biol Chem 1996 Apr 19；271(16)：9298-306)。进一步的研究表明，NGG1基因与另外两个基因一起，双向调节(刺激或者抑制)着酵母中一簇转录激活相关蛋白。(J Biol Chem 1997 Feb 28；272(9)：5571-8)。这样，NGG1基因间接地影响到酵母的生长周期、复制周期，进一步影响到以酵母为生产载体的工程的工程效率。

NGG1基因本身也受到几种蛋白的制约调节作用，这其中便包含了NGG1相互作用蛋白因子3(NGG1-INTERACTING FACTOR 3，NIF3)。NIF3作用于NGG1，同样级联影响了酵母中若干基因的转录过程，从而又影响了酵母的生长周期。(Yeast 13，1077-1090(1997))。

本发明中，我们在人类造血干细胞中克隆到Sc.ccharomyces cerevisiae NIF3基因的同源基因hNIF3-s。

在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中提及的人类hNIF3-s蛋白序列及其核酸序列。

本发明的第一目的就是提供一种新的人基因hNIF3-s(Genbank AccessionNo.AF182416)，该基因是一个人hNIF3-s蛋白基因。

本发明的第二目的是提供一种新的人蛋白hNIF3-s。

本发明的第三目的是提供一种利用重组技术生产上述的新的人hNIF3-s蛋白和核酸序列的方法。

本发明还提供了这种人hNIF3-s蛋白多肽和编码序列的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，该分子包括：编码具有人hNIF3-s蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第236-1291位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.6中从核苷酸第236-1291位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID NO.6中从核苷酸第236-1291位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离出的人hNIF3-s蛋白质多肽，它包括：具有SEQ ID NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.7序列的多肽。

在本发明的另一方面，还提供了一种载体，它包含上述的DNA分子。

在本发明的另一方面，还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞。在一个实例中该宿主细胞是大肠杆菌；在另一实例中，该宿主细胞是真核细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生具有人hNIF3-s蛋白质活性的多肽的方法，其步骤如下：

(1)将编码具有人hNIF3-s蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人hNIF3-s蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第236-1291位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)将步骤(1)中的表达载体转入宿主细胞，形成人hNIF3-s蛋白的重组细胞；

(3)在适合表达人hNIF3-s蛋白多肽的条件下，培养步骤(2)中的重组细胞；

(4)分离出具有人hNIF3-s蛋白活性的多肽。

较佳地，在该方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO.6中第236-1291位的序列。

本发明还提供了与hNIF3-s蛋白多肽特异性结合的抗体。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。