[发明专利]一种新的多肽——人NADH脱氢酶亚单位I－17和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人NADH脱氢酶亚单位Ⅰ-17，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

呼吸链NADH脱氢酶(也称之为复合物Ⅰ或NADH-辅酶Q氧化还原酶)是一种多聚酶复合物，存在于线粒体内膜、叶绿体及蓝细菌中。在蓝细菌中，其又被作为一种NADH-质体醌氧化还原酶。该酶复合物由25-30个多聚肽链亚单位组成，其中有15个亚单位存在于膜上，而这15个亚单位中的7个在许多不同的物种中均由线粒体和叶绿体基因组编码。由这些细胞器编码的保守的亚单位被称之为亚单位Ⅰ(由线粒体中的ND1基因及叶绿体中的NDH1基因编码)，其中含有辅酶Q结合位点[Weidner U.,Geier S.et al.,1993,J Mol Biol,233:109-122]。

呼吸链NADH脱氢酶酶复合物的ND1亚单位与大肠杆菌甲酸脱氢酶的亚单位4及脱氢酶4的亚单位C有着高度的相似性。Paracoccus反硝化NQ08蛋白及大肠杆菌nuoH NADH辅酶Q氧化还原酶亚单位亦为NADH脱氢酶亚单位Ⅰ家族的成员。该蛋白家族的成员在生物体内均参与各种呼吸链的反应，作为电子传递的中间物，负责将电子传递给氧，生成氧离子，与2H⁺结合成H₂O。

众所周知，呼吸链是生物体内电子传递及能量转换的重要方式，而呼吸链反应过程中涉及各种不同酶的作用。这些不同的酶在呼吸链过程中协调作用以促进呼吸代谢过程的完成。其中的任意一种物质突变或表达异常都将导致呼吸链的作用异常。因而，NADH脱氢酶复合物作为呼吸链的重要组成部分亦在此过程中起着重要的调节作用，其表达异常将导致生物体内呼吸链能量代谢的紊乱，从而引发各种相关的代谢紊乱症。

除西瓜及利什曼原虫属的ND1亚单位不含有序列片段1及莱因哈德衣藻不含有序列片段2外，其余该酶亚单位家的成员均同时含有以上所述的两个保守的序列片段。该两个序列片段可能是酶复合物亚单位Ⅰ的活性作用中心，其突变将导致亚单位的表达异常，不能与辅酶Q正常的结合，从而影响其在呼吸链中的作用。该蛋白家族的成员的表达异常通常与生物体内各种与呼吸链相关的发育代谢紊乱症、物质代谢紊乱症等疾病的发生相关。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株以及前列腺组织中，本发明的多肽的表达谱与人NADH脱氢酶亚单位Ⅰ-11的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人NADH脱氢酶亚单位Ⅰ-17。

由于如上所述人NADH脱氢酶亚单位Ⅰ-17蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人NADH脱氢酶亚单位Ⅰ-17蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人NADH脱氢酶亚单位Ⅰ-17蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人NADH脱氢酶亚单位Ⅰ-17以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人NADH脱氢酶亚单位Ⅰ-17的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人NADH脱氢酶亚单位Ⅰ-17的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人NADH脱氢酶亚单位Ⅰ-17的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人NADH脱氢酶亚单位Ⅰ-17的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人NADH脱氢酶亚单位Ⅰ-17的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人NADH脱氢酶亚单位Ⅰ-17异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；