[发明专利]一种新的多肽——膜定向及转运C蛋白28和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--膜定向及转运C蛋白28，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

膜定向及转运A,B,C(mttA,B,C)蛋白是一类大的蛋白家族成员，它们具有相关的序列，从古细菌到高等的真核生物中都含有这三类蛋白，它们介导与含有辅因子的氧化还原蛋白相互作用的膜定向及转运体系。相邻的mttA,mttB,mttC基因形成一个操纵子，它们编码的mttA,B,C蛋白紧密相连。

MttC基因编码一条多肽，该多肽是一种膜蛋白，具有一到两个跨膜部分与一个大的胞质域，mttC蛋白的定向功能位于后面较大的胞质部分。此外，有的mttC蛋白胞质部分中还含有第二个跨膜域。该蛋白在古细菌，支原体，真细菌，蓝细菌，酵母，植物以及人类中的序列相关，但相异程度较mttA与mttB蛋白大。人体中的mttC蛋白较为与众不同，在其氨基端有440个其他生物的mttC蛋白中不曾找到的延伸的氨基酸，该延伸与mttA或mttB无关。mttC蛋白中大的胞质域是孪生精氨酸蛋白的受体，与之整合的mttB蛋白是蛋白转运的核心，mttA蛋白是核心的闸门，能够形成一个长的α-螺旋。

膜定向及转运蛋白可在革兰氏阴性细菌的周质，以及胞外介导其他宿主细胞的定向蛋白表达中起作用。这种表达使得所需的目的蛋白以功能性可溶形式表达分泌，从而便于目的蛋白的纯化，并促进所需的功能蛋白的产生。本发明的多肽与大肠杆菌的mttC蛋白在蛋白水平上有34％的同一性及52％的相似性，且具有相似的生物学功能，故而被认为属于mttC蛋白家族，命名为膜定向及转运C蛋白28。该多肽可用于促进目的蛋白在胞外或周质的定向表达，利于功能性可溶蛋白的产生。

由于如上所述膜定向及转运C蛋白28蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的膜定向及转运C蛋白28蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新膜定向及转运C蛋白28蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--膜定向及转运C蛋白28以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码膜定向及转运C蛋白28的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码膜定向及转运C蛋白28的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产膜定向及转运C蛋白28的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--膜定向及转运C蛋白28的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--膜定向及转运C蛋白28的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与膜定向及转运C蛋白28异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中57-809位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-890位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制膜定向及转运C蛋白28蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。

本发明还涉及一种体外检测与膜定向及转运C蛋白28蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本发明多肽的量或生物活性。