[发明专利]一种新的多肽——人核纤层蛋白14和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人核纤层蛋白14，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

核纤层蛋白是一种细胞外基质糖蛋白，位于细胞膜将上皮细胞与其下的基质分割开的基底层和包围脂肪、肌肉和周围神经细胞的基底膜上。核纤层蛋白是一种大分子量的糖蛋白，有三个由二硫键结合起来的亚基A,B,C。人核纤层蛋白A链中含有许多富含半胱氨酸的重复序列构成的独特的结构域。结构域G呈球状，包含5个重复，有几个保守的甘氨酸和半胱氨酸，在其长臂上有一个Arg-Gly-Asp(RGD)序列。核纤层蛋白A链包含20个内部的富含半胱氨酸的重复序列，分布在三个不相邻的簇中(结构域Ⅲa,Ⅲb和Ⅴ)。结构域Ⅰ+Ⅱ具有一个连续的α螺旋结构，结构域Ⅰva,Ⅰvb和Ⅵ含有一些β折叠结构。[Ehrig,Leivo,Argraves,Ruoslahti&Engvall(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87,3264-3268]

核纤层蛋白的主要作用是将细胞与基质结合起来。细胞与核纤层蛋白的相互作用是通过许多种细胞表面受体介导的。这些受体包括整合蛋白，膜连接蛋白多糖(例如肌营养不良蛋白多糖)以及其他的一些膜表面糖蛋白。其中整合蛋白在核纤层蛋白发挥细胞生长和分化调控的作用中起关键作用。

核纤层蛋白的作用还包括对神经突触的分化、【Current Opinion inNeurobiology 1996,6:97-103】对肌肉细胞的生长【J.Biol.Chem.1997 272:28590-28595】的促进作用。对阿尔兹海默氏症的研究表明，锌离子激活的核纤层蛋白可以与阿尔兹海默氏症的淀粉质前体蛋白结合。【J.Biol.Chem.1996 271:6845-6851】在正常脑组织细胞受到脑胶质瘤的侵犯时会产生核纤层蛋白，纤联蛋白和胶原质Ⅳ。核纤层蛋白会加速细胞扩散。因此核纤层蛋白对加快细胞生长和扩散，肿瘤细胞的生长和转移也起到一定的作用。此外，核纤层蛋白还在轴突生长，神经细胞的再生，细胞凋亡、伤口愈合以及移植组织的存活等生理过程中起作用。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株以及前列腺组织中，本发明的多肽的表达谱与人核纤层蛋白B2链的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人核纤层蛋白14。

由于如上所述人核纤层蛋白14蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人核纤层蛋白14蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人核纤层蛋白14蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人核纤层蛋白14以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人核纤层蛋白14的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人核纤层蛋白14的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人核纤层蛋白14的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人核纤层蛋白14的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人核纤层蛋白14的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人核纤层蛋白14异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。