本发明公开了一种铁皮石斛β‑紫罗兰酮合成关键酶基因DoCCD1及其克隆方法和应用,所述的铁皮石斛β‑紫罗兰酮合成关键酶基因具有如下核苷酸序列:(1)由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列;或(2)由序列SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列同源性在70%以上且编码相同功能蛋白质的氨基酸序列;或(3)在高严谨条件下可与SEQ ID No:1限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。本发明的CCD1基因能够通过降解胡萝卜素生成紫罗兰酮,为了提高铁皮石斛的经济价值,鉴定出具有真正功能的DoCCD1是非常有意义的工作。