本发明涉及病原菌检测技术领域,尤其涉及一种检测小麦叶锈菌的试剂盒及鉴别方法。该试剂盒中包括5条等温扩增引物,其序列如SEQ ID NO.1~5所示。该5条引物以人为选定的小麦叶锈菌特异性序列(如SEQ ID NO.6)为基础而设计得到,含有小麦叶锈菌DNA片段的待测物能够利用上述引物进行大量扩增,所得的扩增产物可以与荧光染料发生颜色变化,而不含小麦叶锈菌DNA片段的待测物则不会产生任何扩增,不与荧光染料发生颜色变化,从而能够快速鉴别待测物中是否含有小麦叶锈菌DNA,且其他病原菌对该结果无干扰,检测灵敏度高、特异性好、检测率高。
本发明公开了一种用于小麦条锈菌检测的引物对及探针和应用,该引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示;用于小麦条锈菌RPA或PCR检测的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.17本发明的用于小麦条锈菌检测的引物对及探针,以小麦条锈菌效应基因PS4593为靶标基因,设计特异性RPA引物和探针,结合侧流层次试纸条,建立了小麦病菌条锈病菌的RPA‑LFD快速检测体系,实现潜育期小麦条锈病菌的可视化快速检测,并利用该体系检测到田间潜育小麦条锈菌。
本发明公开了一种条锈菌糖转运蛋白Pst25662,氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述糖转运蛋白表达基因Pst25662的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述糖转运蛋白具有蔗糖和多种己糖转运能力,在条锈菌诱导下基因Pst25662上调表达。本发明利用农杆菌介导的遗传转化,获得基因Pst25662沉默的转基因植株,并验证了转基因干扰植株对条锈菌表现出抗性。本发明丰富了本领域技术人员对小麦条锈菌碳源获取的新认知,对后续研究小麦抗条锈病品种及可持续调控提供了思路,对生物防治的药物靶标设计具有实质性参考意义。