本发明公开了鞘磷脂酶突变体及其在sdLDL胆固醇检测中的应用,属于脂类含量检测技术领域。具体涉及五种鞘磷脂酶突变体:鞘磷脂酶突变体D118Q,鞘磷脂酶突变体N122D,鞘磷脂酶突变体N333E,鞘磷脂酶突变体Q376Y,鞘磷脂酶突变体MUT,其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:2~6所示所述鞘磷脂酶突变体在sdLDL胆固醇检测中的应用。本发明还公开了五种鞘磷脂酶突变体的编码基因,其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:8~12所示。本发明的五种鞘磷脂酶突变体,与野生型鞘磷脂酶相比,活性更高,提高了2~3倍,用于sdLDL胆固醇检测时,所使用的活力单位更少,效率更高。