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[发明专利]一种角膜缘干细胞的冻存液及冻存方法-CN201610237666.8有效
发明人：葛啸虎;陈海佳;王一飞;吴子杰 -专利权人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
申请日： 2016-04-14 - 公布日： 2018-06-12 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及干细胞领域，公开了角膜缘干细胞的冻存液及冻存方法。本发明所述角膜缘干细胞的冻存液包括CHIR99021。与常规角膜缘干细胞的冻存液相比，采用本发明所述角膜缘干细胞的冻存液冻存后复苏，不仅在细胞活性上明显高于其他常规冻存液，细胞增殖能力也优于常规细胞冻存液，可以用于角膜缘干细胞的长期保存及应用。本发明所述角膜缘干细胞的冻存方法将角膜缘干细胞消化、离心后，去除上清，加入本发明所述角膜缘干细胞的冻存液分装于冻存管中冻存。与常规的冻存方法相比，本发明角膜缘干细胞的冻存方法冻存的细胞复苏后不仅在细胞活性上明显高于其他常规方法，细胞增殖能力也优于常规的冻存方法。
角膜缘干细胞冻存冻存液细胞增殖能力细胞活性常规的常规细胞长期保存细胞复苏冻存管干细胞分装去除复苏消化应用

[发明专利]角膜缘干细胞及其培养方法和应用-CN201610356834.5在审
发明人：曾宪卓;鲁菲 -专利权人：深圳爱生再生医学科技有限公司
申请日： 2016-05-26 - 公布日： 2016-09-21 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明公开了一种角膜缘干细胞及其培养方法和应用，其中，该角膜缘干细胞的培养方法包括步骤如下：获取可增殖角膜缘组织；将所述可增殖角膜缘组织加入含FBS和Ca²⁺的MEM培养基中培养；本发明角膜缘干细胞的培养方法可以抑制角膜缘干细胞的分化，避免角膜缘干细胞因分化而产生其他细胞，保证培养得到的角膜缘干细胞的纯度，降低分化程度，从而提高了移植角膜缘干细胞治疗相应眼部疾病的疗效。
角膜干细胞及其培养方法应用

[发明专利]冻存自体角膜缘干细胞的无饲养层构建角膜上皮方法-CN200410026154.4无效
发明人：屈雷;王馨;窦忠英 -专利权人：西北农业科技大学
申请日： 2004-05-20 - 公布日： 2005-02-16 - 主分类号： C12N5/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种冻存自体角膜缘干细胞的无饲养层构建角膜上皮方法，将自体角膜缘干细胞体外长期保存，可以满足在不同的实验条件下，对角膜缘干细胞的运输、保存和增殖的要求。并用保存的角膜缘干细胞采用无饲养层的方法构建角膜上皮植片，实现临床上角膜缘干细胞缺损后的角膜上皮自体重建；本发明能够成功构建的人工角膜上皮植片，自体移植到角膜缘干细胞缺失的角膜表面，复明效果明显。
角膜干细胞饲养构建上皮方法

[发明专利]用于通过利用羊膜载玻片支架培养角膜缘干细胞的方法-CN201680076831.4有效
发明人：郑素享;李炫姃;徐庆律 -专利权人：加图立大学校产学协力团
申请日： 2016-07-22 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： C12N5/079 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于在羊膜载玻片支架上培养角膜缘组织，从而能够有效地增加角膜缘组织衍生的上皮细胞片中的角膜缘干细胞的比例，以及能够培养所述角膜缘干细胞的方法。根据本发明，角膜缘组织衍生的上皮细胞片中的角膜缘干细胞的比例可以稳定且迅速地增加，因此当将角膜缘组织衍生的上皮细胞片移植到患有角膜缘干细胞缺陷的患者中时，可以提高成功率。
用于通过利用羊膜载玻片支架培养角膜干细胞方法

[发明专利]人成纤维细胞滋养的人角膜缘干细胞组织工程产品及制备-CN200410019342.4无效
发明人：张晓敏;孙慧敏;李筱荣 -专利权人：天津医科大学眼科中心
申请日： 2004-05-27 - 公布日： 2005-07-06 - 主分类号： C12N5/08 文献下载
摘要：一种以人角膜缘成纤维细胞为滋养层的人角膜缘干细胞—羊膜组织工程复合体，其特征在于：在组织学形态上接近人角膜上皮形态，在免疫学表型上与人角膜缘上皮类似，其超微结构显示细胞与细胞之间的连接发育成熟，上皮细胞与羊膜载体之间为紧密的粘连其培养方法依照下列步骤完成：①人角膜缘干细胞的体外培养载体—羊膜的制备；②人角膜缘成纤维细胞滋养层的制备；③人角膜缘上皮细胞悬液的制备；④人角膜缘干细胞—羊膜复合体的培养。本人角膜缘干细胞—羊膜复合体优点是：具有和人角膜缘上皮相似的表型，为治疗角膜缘干细胞缺陷性眼表疾病提供了安全而有效的生物组织工程产品。
纤维细胞滋养角膜干细胞组织工程产品制备

[发明专利]角膜缘干细胞原代培养方法-CN201811178859.6有效
发明人：徐彬;樊廷俊;田成磊;郑明月 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2018-10-10 - 公布日： 2021-09-24 - 主分类号： C12N5/079 文献下载
摘要：本发明涉及一种角膜缘干细胞原代培养方法。其特征在于经庆大霉素溶液处理后的角膜缘组织剪碎后置于组织消化液中消化、过滤，并将滤液离心后获得的角膜缘组织细胞沉淀进行短暂冻存，再将过滤剩余的组织块（即滤渣）用角膜缘干细胞滋养层培养液重悬，接种于用包被液预处理的细胞培养板进行培养，获得角膜缘成纤维细胞，然后用丝裂霉素C溶液处理生长至对数期的角膜缘成纤维细胞，制成角膜缘干细胞滋养层，最后复苏短暂冻存的组织细胞，用角膜缘干细胞原代培养液重悬后，接种在铺有角膜缘干细胞滋养层的细胞培养板中进行原代培养即得该角膜缘干细胞安全性高、稳定性好，完好地满足了临床治疗的高要求。
角膜干细胞培养方法

[发明专利]一种无血清培养角膜缘基质干细胞并于体外诱导成球和诱导分化的方法-CN201810574667.0有效
发明人：欧阳宏;朱丽琼 -专利权人：中山大学中山眼科中心
申请日： 2018-06-06 - 公布日： 2022-08-26 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：本发明公开了一种无血清培养角膜缘基质干细胞及其诱导分化和干细胞成球的方法。本发明还同时提供了用于体外诱导角膜缘基质干细胞成球或分化成角膜缘基质细胞的培养基组合。本发明所使用的无血清培养基组合，能提供细胞生长增殖所需的充足营养与良好环境，能够稳定的在体外扩增培养角膜缘基质干细胞，而且能确保扩增培养后仍保持角膜缘基质干细胞的干性以及特异性。同时成功构建了诱导分化成角膜基质细胞的体系，可用于角膜缘基质干细胞的实验研究、角膜病变的细胞治疗以及角膜损伤的移植，具有广泛的科学效益和社会经济效益。
一种血清培养角膜基质干细胞体外诱导分化方法

[发明专利]AcSDKP在角膜缘干细胞分离培养中的应用及角膜缘干细胞的培养方法-CN201510788261.9在审
发明人：葛啸虎;陈海佳;王一飞;吴子杰;张维敏 -专利权人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
申请日： 2015-11-16 - 公布日： 2016-01-13 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明涉及干细胞培养领域，尤其涉及AcSDKP在角膜缘干细胞分离培养中的应用及角膜缘干细胞的培养方法。本发明提供的培养基中，以胎牛血清促进角膜缘干细胞的生长，以AcSDKP抑制成纤维细胞的生长。因此，采用本发明提供的培养基能够具有选择性的分离角膜缘干细胞，且分离培养所得的角膜缘干细胞的纯度和数量皆较高，且由于成纤维细胞的生长受到抑制，角膜缘干细胞受到成纤维细胞分泌物的影响较少，干性保持良好。实验表明，采用本发明提供的培养基分离角膜缘干细胞，细胞中抗体CX43的阳性率为0.1％，AE5的阳性率为0.3％，BrdU的阳性率为50.3％，PCNA的阳性率为45.9％。该效果显著优于现有技术。
acsdkp 角膜干细胞分离培养中的应用方法

[发明专利]一种简易角膜缘干细胞分离和体外培养试剂盒及方法-CN201410062366.1在审
发明人：马蕾;程潇;于花 -专利权人：山西医科大学
申请日： 2014-02-22 - 公布日： 2015-08-26 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明涉及一种简易原代角膜缘干细胞分离和体外培养试剂盒及方法。所述简易原代角膜缘干细胞分离和体外培养试剂盒包括：组织清洗液、冷消化液、热消化液和培养液。所述简易原代角膜缘干细胞分离和体外培养方法包括下述步骤：角膜缘组织提取、消化、体外培养。使用本发明所述的简易原代角膜缘干细胞分离和体外培养试剂盒及方法进行角膜缘干细胞分离和体外培养，操作简单，干细胞得率高，所得原代干细胞损伤少，增值能力强，体外培养成功率高，重现性好。
一种简易角膜干细胞分离体外培养试剂盒方法

[发明专利]角膜缘干细胞稳定性的体外培养方法-CN201811178858.1在审
发明人：徐彬;樊廷俊;郑明月;田成磊 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2018-10-10 - 公布日： 2019-02-12 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：本发明涉及一种角膜缘干细胞稳定性的体外培养方法。其特征是经庆大霉素溶液处理后的角膜缘组织剪切小块后置于组织消化液中消化、过滤、收集组织细胞沉淀，之后用角膜缘干细胞原代培养液重悬上述沉淀，接种于用角膜缘干细胞包被液预处理的细胞培养板进行原代培养，待出现细胞克隆球后，使用组织消化液对细胞克隆球进行消化，然后离心、收集细胞沉淀，再用角膜缘干细胞继代培养液重悬细胞，后接种在上述预处理的细胞培养板中进行继代培养，即获得稳定的角膜缘干细胞。为获得更多稳定的角膜缘干细胞，在上述的继代培养之后还可进行多代扩增培养，获得稳定性好、安全性高、以满足临床上应用的大量干细胞。
角膜缘干细胞培养液预处理细胞克隆球细胞培养板继代培养体外培养消化液重悬沉淀接种庆大霉素溶液消化角膜缘组织扩增培养细胞沉淀原代培养组织细胞包被液干细胞剪切多代继代小块过滤细胞应用

[发明专利]一种角膜缘干细胞的体外扩增方法-CN202011059056.6有效
发明人：湛振键;齐国光;刘世豪 -专利权人：广东康盾创新产业集团股份公司
申请日： 2020-09-30 - 公布日： 2023-04-14 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：本发明提供一种角膜缘干细胞的体外扩增方法，包括如下步骤：(1)将LSCs干细胞组织块剪碎，冲洗，并将90～95％质量的LSCs干细胞组织加入30～50倍体积消化液消化，冲洗，加入8～10倍体积LSCs干细胞培养基；(2)加入0.1～0.5倍体积组织保护剂，离心，弃上清；(3)采用Hank液冲洗，重悬，并与5～10％未消化的角膜缘干细胞组织混合种植至有孔培养板中培养，得到角膜缘干细胞；本发明可有效保护酶解分离过程的离散角膜缘干细胞的作用，保持细胞增殖活力，使在分离过程中保持细胞稳定的增殖活性，实现角膜缘干细胞的整体高效稳定的体外扩增培养。
一种角膜干细胞体外扩增方法

[发明专利]角膜缘干细胞及其制备方法-CN201910406925.9有效
发明人：武征;王颖薇;徐李玲;何程智;李国正 -专利权人：广州市亮目生物科技有限公司
申请日： 2019-05-16 - 公布日： 2021-04-27 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：本发明涉及一种高活性角膜缘干细胞及其制备方法，其制备方法包含以下步骤：获取角膜组织，将待用角膜组织预处理；向预处理后的角膜组织中加入含有细胞诱导剂的细胞冻存液；冷冻加有细胞冻存液的角膜组织；所述的细胞诱导剂是可诱导角膜组织中的细胞局部发生炎症或应激反应，但不直接引起细胞死亡的试剂。该方法在细胞培养前通过简单的低温冷冻操作即可在角膜组织中实现角膜缘干细胞与成熟分化的各类角膜细胞的筛选，同时可实现高活性角膜缘干细胞的长期冷冻保存，该方法无需特定的仪器设备，操作简便，筛选效率高，筛选细胞纯度高，可提高角膜缘干细胞的比例和活性。
角膜干细胞及其制备方法

[发明专利]一种便于使用的组织工程角膜上皮植片及其制备、应用方法-CN202111548044.4在审
发明人：梁庆丰;王乐滢;韦振宇;张子俊;陈前坤 -专利权人：首都医科大学附属北京同仁医院
申请日： 2021-12-16 - 公布日： 2022-08-19 - 主分类号： A61F2/14 文献下载
摘要：本发明提供一种便于使用的组织工程角膜上皮植片，属于眼科治疗材料领域，所述植片包括支架，以及与所述支架凹面贴合的角膜缘上皮干细胞，以及贴合在所述角膜缘上皮干细胞上的羊膜，以及贴合在所述羊膜上的角膜缘微环境细胞本发明可使患者无需手术，仅通过简单的类似佩戴隐形接触镜的方式，将植片放置于角膜上即可实现角膜缘上皮及其微环境的移植重建，从而治疗角膜缘干细胞缺乏，促进缺损的角膜上皮愈合，减少角膜组织的瘢痕形成。
一种便于使用组织工程角膜上皮及其制备应用方法

[发明专利]培养人类角膜缘干细胞的方法-CN201710770991.5在审
发明人：欧耿良 -专利权人：三鼎生物科技股份有限公司
申请日： 2017-08-31 - 公布日： 2019-03-05 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明揭露一种培养人类角膜缘干细胞的方法，其步骤包含：预处理一滋养细胞；将滋养细胞接种于一多孔膜；将多孔膜置入一容器中，使容器分隔为第一培养室以及第二培养室，其中，滋养细胞位于第二培养室；于容器中注入培养基；以及将人类角膜缘干细胞置于第一培养室。相较于习知技术，本发明培养人类角膜缘干细胞的方法利用多孔膜的培养技术培养人类角膜缘干细胞，使人类角膜缘干细胞的扩大率更优于传统培养方式。此外，本发明所使用的培养基不含有具毒性的二甲基亚砜成分，以降低细胞受毒杀的机率。
人类角膜干细胞培养室多孔膜滋养培养基细胞预处理二甲基亚砜传统培养技术培养细胞接种置入分隔

[发明专利]干细胞制剂及其制备方法-CN201610356833.0在审
发明人：曾宪卓;鲁菲 -专利权人：深圳爱生再生医学科技有限公司
申请日： 2016-05-26 - 公布日： 2016-10-26 - 主分类号： A61K38/18 文献下载
摘要：本发明公开了一种干细胞制剂及其制备方法，其中，所述干细胞制剂包括：角膜缘干细胞；碱性成纤维细胞生长因子；含有FBS和Ca²⁺的MEM培养基，其中，所述FBS的质量分数为1～14％，Ca²⁺在所述含有FBS和Ca²⁺的MEM培养基中的浓度为0.01～0.09mmol/L；在所述干细胞制剂中，所述角膜缘干细胞的浓度为(1×10⁵)～(1×10⁹)个/ml，所述碱性成纤维细胞生长因子的浓度为1～100ng/ml。本发明干细胞制剂提供了体外培养的角膜缘干细胞，进而通过施行角膜缘干细胞移植，可以改善或重建眼表结构，提高了移植成功率，从而有效地治疗眼表泪液病以及角膜病。
干细胞制剂及其制备方法

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