本发明涉及基因检测技术领域,具体公开一种用于检测蓝点马鲛的实时荧光PCR引物和探针组合以及试剂盒。所述检测蓝点马鲛的引物和探针中,上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示,下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示,探针的序列如SEQ ID NO:3所示。本发明通过设计的引物和探针组合,建立了一种针对蓝点马鲛的实时荧光PCR检测方法,该方法的特异性强,能够快速准确的从所有亲缘近似种和生态近似种中检测出蓝点马鲛,且灵敏度高、最低检测限可达10pg/μL,准确度好,对蓝点马鲛的准确快速鉴别和食品安全保障具有重要的意义。