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[发明专利]制备猪链球菌GZ0565株无痕缺失突变株的方法-CN201210467416.5有效
发明人：吴宗福;邵靓;琚存祥;王卫雪;唐敏;陆承平 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2012-11-19 - 公布日： 2013-02-13 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明提供制备猪链球菌GZ0565株无痕缺失突变株的方法，涉及基因工程领域。该方法包括如下步骤：采用融合PCR方法，得到由待敲除靶基因上下游片段组成的同源重组片段；将同源重组片段插入pSET4S质粒，然后电转化至猪链球菌GZ0565株的感受态细胞进行同源重组，筛选猪链球菌GZ0565株无痕缺失突变株。本发明提供的制备猪链球菌GZ0565株无痕缺失突变株的方法，筛选效率高，得到的猪链球菌GZ0565株无痕缺失突变株，敲除了靶基因，但是不含有抗性基因，因此具有成为疫苗株的潜能。
制备链球菌 gz0565 株无痕缺失突变方法

[发明专利]布鲁氏菌弱毒疫苗突变株及其构建方法与应用-CN200710099648.9无效
发明人：王效义;王棠;郭兆彪;宋亚军;周蕾;杨瑞馥 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所
申请日： 2007-05-25 - 公布日： 2007-12-26 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了布鲁氏菌弱毒疫苗突变株及其构建方法与应用。其目的是提供布鲁氏菌弱毒疫苗突变株及其构建方法与其在制备布鲁氏菌预防性疫苗中的应用。该布鲁氏菌弱毒疫苗突变株是将布鲁氏菌弱毒疫苗株缺失bp26、wboA、omp31、P39或pgm基因后得到的布鲁氏菌弱毒疫苗突变株。以小鼠为模型的动物实验结果表明，突变株的免疫保护作用良好，而且毒力不增加。此外，由于本发明构建的突变株缺失了某个抗原蛋白基因，因此还可以根据缺失基因的免疫生物学特性建立区分疫苗免疫和自然感染的鉴别诊断方法。本发明的布鲁氏菌弱毒突变株有望发展成为带标记的弱毒疫苗，对控制布病的流行、传播和国民经济的健康发展具有重要的实际意义，应用前景广阔。
布鲁氏菌疫苗突变及其构建方法应用

[发明专利]区分疫苗免疫和野毒感染动物的猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型双基因缺失突变株的疫苗及应用-CN200710052792.7有效
发明人：贝为成;陈焕春;刘金林;周锐;何启盖;金梅林;方六荣;吴斌;肖少波;曹胜波 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2007-07-20 - 公布日： 2008-09-17 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明属于动物细菌基因工程领域，具体涉及一种区分疫苗免疫和野毒感染动物的猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型双基因缺失突变株的构建、疫苗及应用。本发明得到一株区分疫苗免疫动物和野毒感染动物的猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型基因缺失突变株APP－7－mut01(保藏号为CCTCC NO：M207004)。该株缺失APP血清7型两个主要的毒力因子apxIIC和apxIVAN基因。突变株对猪安全，且具良好免疫原性的毒素ApxIIA和ApxIVAC蛋白，保证了疫苗的免疫效力。用突变株的疫苗免疫动物，动物体内不再产生针对Apx IVAN蛋白抗体，而野毒猪感染的产生针对ApxIVAN蛋白抗体。本发明还公开了利用该双基因缺失突变株构建，疫苗制备及应用。
区分疫苗免疫感染动物胸膜肺炎放线杆菌血清基因缺失突变应用

[发明专利]狂犬病病毒ERA减毒疫苗突变株及其制备方法和狂犬病活疫苗-CN201410056860.7有效
发明人：李耀东;刘俊生;刘延亭;郑杰;熊炜;高杨 -专利权人：北京中联康生物科技股份有限公司
申请日： 2014-02-19 - 公布日： 2017-10-03 - 主分类号： C12N7/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种狂犬病病毒ERA减毒疫苗突变株及其制备方法和狂犬病活疫苗。其中，狂犬病病毒ERA减毒疫苗突变株表达编码突变糖蛋白，并且所述突变糖蛋白具有下列突变信号肽第2位的氨基酸缺失；信号肽的第3位的氨基酸缺失；第333位氨基酸由精氨酸突变为谷氨酸；缺失psi假基因区；所述糖蛋白的由此上述狂犬病病毒ERA减毒疫苗突变株更安全、有效、成本低。
狂犬病病毒 era 减毒疫苗突变及其制备方法疫苗

[发明专利]一种迟钝爱德华氏菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株、相关制剂及应用-CN200910052707.6有效
发明人：张元兴;王鑫;王启要 -专利权人：华东理工大学
申请日： 2009-06-09 - 公布日： 2010-01-20 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及一种迟钝爱德华氏菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株，它是迟钝爱德华氏菌毒株的减毒活疫苗，其中缺失了迟钝爱德华氏菌毒株的分支酸合成酶基因aroC，迟钝爱德华氏菌毒株是迟钝爱德华氏菌毒株EIB202，减毒活疫苗还缺失了迟钝爱德华氏菌毒株的内源性质粒，还提供了上述迟钝爱德华氏菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株的制剂，及相关的在防治养殖鱼类的迟钝爱德华氏菌病中应用，本发明的迟钝爱德华氏菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株或相关制剂消除了传统减毒活疫苗普遍存在的潜在环境和产品安全风险
一种迟钝爱德华野生标记基因缺失突变相关制剂应用

[发明专利]一种溶藻弧菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株、相关制剂及应用-CN201110266453.5有效
发明人：王启要;刘欢;张元兴;刘琴 -专利权人：华东理工大学
申请日： 2011-09-08 - 公布日： 2011-12-28 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及一种溶藻弧菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株，它是溶藻弧菌毒株的减毒活疫苗，其中缺失了溶藻弧菌毒株的sRNA分子伴侣蛋白基因hfq，溶藻弧菌毒株是溶藻弧菌毒株EPGS020401，保藏号为：209306，还提供了上述溶藻弧菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株的制剂，及相关的在防治养殖鱼类的溶藻弧菌病中应用，本发明的溶藻弧菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株或相关制剂消除了传统减毒活疫苗普遍存在的潜在环境和产品安全风险
一种弧菌野生标记基因缺失突变相关制剂应用

[发明专利]一种溶藻弧菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株、相关制剂及应用-CN201010288980.1无效
发明人：王启要;刘欢;张元兴;刘琴 -专利权人：华东理工大学
申请日： 2010-09-21 - 公布日： 2011-01-19 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及一种溶藻弧菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株，它是溶藻弧菌毒株的减毒活疫苗，其中缺失了溶藻弧菌毒株的sRNA分子伴侣蛋白基因hfq，溶藻弧菌毒株是溶藻弧菌毒株EPGS020401，保藏号为：CCTCC No.AB209306，还提供了上述溶藻弧菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株的制剂，及相关的在防治养殖鱼类的溶藻弧菌病中应用，本发明的溶藻弧菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株或相关制剂消除了传统减毒活疫苗普遍存在的潜在环境和产品安全风险
一种弧菌野生标记基因缺失突变相关制剂应用

[发明专利]一种检测乙型肝炎病毒前S2区缺失突变的引物、探针及方法-CN202210936206.X在审
发明人：刘勇;陈雨欣;李鸣;尹盛夏;吴超 -专利权人：南京鼓楼医院
申请日： 2022-08-05 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测乙型肝炎病毒前S2区缺失突变的引物、探针，包括正向特异引物HBV PRS2F和反向特异引物HBV PRS2R；针对野生株和突变株的共有序列探针YT和针对突变株缺失部位序列探针MT；本发明还另外提供一种检测乙型肝炎病毒前S2区缺失突变的方法，通过上述引物和探针，对乙型肝炎病毒前S2区HBV PreS2的保守区域和缺失突变区域同时进行荧光定量PCR检测，并根据CT值差异进行判读，确定缺失突变的情况。本发明通过一次荧光定量PCR反应检测出HBV PreS2缺失突变情况，全部时长不超过4小时，特异性强，灵敏度高，操作简单，且检测费用远低于测序法，节约检测经费，有利于临床推广普及。
一种检测乙型肝炎病毒 s2 缺失突变引物探针方法

[发明专利]一株GRA17基因缺失的弓形虫弱毒虫突变株及其制备方法-CN201611043674.5在审
发明人：王金磊;黄思扬;陈凯;侯俊玲;李法财;宋慧群;朱兴全 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2016-11-24 - 公布日： 2017-07-21 - 主分类号： C12N1/11 文献下载
摘要：本发明公开了一株GRA17基因缺失的弓形虫弱毒虫突变株，所述的GRA17基因缺失的弓形虫弱毒虫突变株为LZ△GRA17，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NOV201656；并提供了其制备方法本发明的有益效果为本发明提供的一株GRA17基因缺失的弓形虫弱毒虫突变株及其制备方法，是建立在分子生物学基础上，基于CRISPR/Cas9基因敲除技术，构建的基因缺失虫株，虫株具有毒性减弱，并丧失了对小鼠的致死性的生物学特性，是具有巨大应用价值的虫株，可作为减毒活疫苗的候选虫株。
gra17 基因缺失弓形虫毒虫突变及其制备方法

[发明专利]检测新冠病毒Alpha毒株S基因Δ69/70HV缺失突变位点的引物、探针及其应用-CN202110910969.2在审
发明人：何庆华 -专利权人：南昌大学
申请日： 2021-08-09 - 公布日： 2021-11-12 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了检测新冠病毒Alpha毒株S基因Δ69/70HV缺失突变位点的引物、探针及其应用，属于生物技术领域。本发明优化了Alpha突变毒株中S基因上Δ69/70HV缺失突变位点的引物序列及荧光探针序列，优化后的序列具有特异性高、信号灵敏等优势，可有效地通过Δ69/70del引物、探针来快速检测出待测新冠病毒株是否具有Δ69/70HV缺失的S基因，可作为判定是否为Alpha毒株的有效证明之一，为判定待测新冠病毒株是否为Alpha突变毒株提供检测手段。在反应管中同时加入本发明的新冠病毒Alpha毒株和原始毒株的S基因扩增引物和荧光探针混合物后，无需设置两个反应管来分别进行PCR检测，在同一个反应管中就可鉴别出待测样本是原始毒株的S基因亦或是Alpha毒株的S基因Δ69/70HV缺失型。
检测病毒 alpha 基因 69 70 hv 缺失突变引物探针及其应用

[发明专利]草鱼呼肠孤病毒S7基因突变株及其应用-CN201510206857.3在审
发明人：王浩;吕利群;宗乾坤;许丹;喻飞;鲁建飞;夏思瑶 -专利权人：上海海洋大学
申请日： 2015-04-27 - 公布日： 2015-08-12 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种草鱼呼肠孤病毒S7基因突变株及其应用，该突变株的保藏号为CCTCC NO：V201515。研究发现该突变株感染CIK细胞后不产生明显的细胞病变效应，并能在CIK细胞中复制扩增，序列分析表明该突变株相比于GCRV-HZ08株S7基因在583bp至1008bp处出现基因缺失，缺失片段为426bp，并且S2中间也出现3个碱基的缺失引起一小段编码的氨基酸序列变异。本发明的突变株为比较性地研究同一种草鱼呼肠孤病毒不同突变型提供了生物学材料，提示VP56蛋白质在该基因型病毒感染扩增过程中不是必需的蛋白质，有助于进一步研究草鱼呼肠孤病毒的增殖和感染机制，以有效防治草鱼出血病
草鱼呼肠孤病毒 s7 基因突变及其应用

[发明专利]柱状黄杆菌VI型分泌系统效应分子及其免疫蛋白及应用-CN202210146433.2在审
发明人：聂品;李楠;杨柳;龙苏;陈善楠;李丽 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2022-02-17 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：申请人在此基础上提供了柱状黄杆菌竞争生长相关基因在细菌检测中的应用，基因缺失突变株的构建方法以及四株基因缺失突变株。还特别涉及利用这些基因缺失突变株，可以实现柱状黄杆菌与其他细菌共培养时，竞争生长能力下降；进而在构建候选疫苗株，通过在候选疫苗株中敲除这些细菌竞争生长必需基因，从而实现候选疫苗株在自然界中的自然清除。
柱状杆菌 vi 分泌系统效应分子及其免疫蛋白应用

[发明专利]一种构建伪狂犬病毒基因缺失弱毒株的方法及其应用-CN202010580858.5有效
发明人：商营利;孔正杰 -专利权人：山东农业大学
申请日： 2020-06-23 - 公布日： 2022-08-09 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明提供一种构建伪狂犬病毒基因缺失弱毒株的方法及其构建的重组病毒与应用。本方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建伪狂犬病毒基因缺失弱毒株，该方法构建的伪狂犬病毒基因缺失弱毒株在UL13基因部位发生特异性缺失突变。所得伪狂犬病毒基因缺失弱毒株诱导的I型IFN基因表达量显著提高，能产生更强的天然免疫反应，而病毒自身的复制无显著差异。因此，UL13基因缺失突变能显著降低伪狂犬病毒导致的免疫抑制，具有重要的潜在应用价值。
一种构建狂犬病毒基因缺失弱毒株方法及其应用

[发明专利]迟钝爱德华氏菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株、相关制剂及其应用-CN201010541646.2有效
发明人：王启要;陈涛;王鑫;肖静凡;刘琴;张元兴 -专利权人：华东理工大学
申请日： 2010-11-11 - 公布日： 2011-02-16 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及一种迟钝爱德华氏菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株，它是迟钝爱德华氏菌毒株的减毒活疫苗，其中缺失了迟钝爱德华氏菌毒株的分支酸合成酶基因aroC，三型分泌系统效应元件基因eseB，escA，eseC和eseD，以及内源性质粒，较佳地，迟钝爱德华氏菌毒株是迟钝爱德华氏菌毒株EIB202，其保藏号为：CCTCC No：M208068，内源性质粒是质粒pEIB202，迟钝爱德华氏菌野生毒株的无标记基因缺失减毒突变株是减毒株WED，其保藏号为：CCTCC NO：M2010278，还提供了相关制剂及应用，本发明的减毒突变株或相关制剂消除了传统减毒活疫苗普遍存在的潜在环境和产品安全风险，是针对养殖鱼类的爱德华氏菌病的一种安全、
迟钝爱德华野生标记基因缺失突变相关制剂及其应用

[发明专利]一种噬菌体繁殖相关基因的基因敲除方法和应用-CN202211148019.1在审
发明人：杨洪江;李玥莹;李东航;韩庆竹;李佩泽 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2022-09-20 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种噬菌体繁殖相关基因的基因敲除方法，所述方法以噬菌体繁殖相关基因为目的基因进行敲除，该方法在筛选基因缺失突变株时使用噬菌体排除野生型菌株的干扰，同时在含有抗生素的LB培养基验证抗生素敏感性，排除单交换子的干扰；所述方法在基因敲除过程中受sacB基因调控的蔗糖敏感性失活后，仍能够筛选出基因缺失突变株。本发明提供了一种在基因敲除过程中受sacB基因调控的蔗糖敏感性失活后，仍可以快速筛选出基因缺失突变株的方法。利用本发明方法得到的基因缺失突变株后，可以与野生型菌株做生物学特性实验进行比对，进一步研究宿主菌和噬菌体的相互作用分子机制。
一种噬菌体繁殖相关基因方法应用

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