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[发明专利]永生化饲养层细胞株的构建方法、永生化饲养层细胞株及应用-CN202110266099.X在审
发明人：邹畅;张荟蓉;刘东成 -专利权人：深圳市人民医院
申请日： 2021-03-11 - 公布日： 2021-06-11 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种永生化饲养层细胞株的构建方法、永生化饲养层细胞株及应用，本发明选择将至少两种永生化基因感染进饲养层细胞中，两种永生化基因通过不同的促进细胞永生化的途径对饲养层细胞永生化实现协同促进作用，并得到永生化饲养层细胞株，弥补了饲养层细胞永生化方法的空白，为评价药物治疗肿瘤或控制肿瘤细胞增殖效果以及确定细胞增殖或衰老机理提供了广泛的细胞资源。
永生饲养细胞株构建方法应用

[发明专利]一种永生化细胞株筛选方法、永生化施旺细胞株及其构建方法-CN202211437945.0在审
发明人：郑健;王楠;南国新 -专利权人：重庆医科大学附属儿童医院
申请日： 2022-11-16 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：发明提供了一种永生化细胞株筛选方法、永生化施旺细胞株及其构建方法，通过导入永生化基因及抗性基因构建永生化模型，先进行传代6‑7代扩增细胞，再进行药物筛选的方法，可以更为高效、快速的构建永生化细胞株，缩短构建永生化细胞株的时间和减少抗生素的用量
一种永生细胞株筛选方法化施旺及其构建

[发明专利]产生微粒的方法-CN201480008392.4在审
发明人：约翰·辛登;拉腊·斯泰瓦纳托;伦道夫·考特林 -专利权人：兰诺龙有限公司
申请日： 2014-02-12 - 公布日： 2015-12-09 - 主分类号： A61K31/711 文献下载
摘要：本发明基于条件永生化细胞能够产生微粒这一发现。所述条件永生化细胞可以是干细胞。实施例表明从条件永生化的神经干细胞和CD34+细胞中可以成功地收集到微粒。条件永生化提供了一种产生诸如外来体的微粒的无性细胞的稳定来源。条件永生化细胞作为“产生者细胞”用于产生诸如外来体的、典型地收集或分离自条件永生化细胞的微粒。
产生微粒方法

[发明专利]一种永生化口腔上皮细胞及其制备方法和应用-CN202211085437.0在审
发明人：朱京山 -专利权人：北京和杰创新生物医学科技有限公司
申请日： 2022-09-06 - 公布日： 2022-12-06 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本申请涉及永生化细胞的技术领域，具体公开了一种永生化口腔上皮细胞及其制备方法和应用。本申请公开了永生化口腔上皮细胞的制备方法，具体包括以下步骤：利用SV40 LT过表达慢病毒对口腔上皮细胞进行细胞感染，经过细胞筛选、鉴定、传代，即得永生化口腔上皮细胞。利用本申请提供的制备方法能够快速获得永生化口腔上皮细胞，且永生化口腔上皮细胞的细胞密度和细胞活性较高。
一种永生口腔上皮细胞及其制备方法应用

[发明专利]一种构建永生化猪肝星状细胞系的方法、永生化猪肝星状细胞系和应用-CN201910084613.0有效
发明人：郝月;顾宪红 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2019-01-29 - 公布日： 2020-06-09 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提供一种构建永生化猪肝星状细胞系的方法、永生化猪肝星状细胞系和应用，涉及永生化细胞技术领域，本发明所述方法从猪肝脏中分离得到正常的猪肝星状细胞，以SV40LT过表达慢病毒转染，得到永生化的猪肝星状细胞系本发明采用包含SV40LT序列的慢病毒载体对猪肝星状细胞进行永生化，具有可感染非分裂期细胞、容纳外源性基因片段大，可长期表达等优点。本发明所述方法构建的永生化猪肝星状细胞系呈伸展状态生长，有伪足，细胞轮廓清晰，细胞完整，具有与原代猪肝星状细胞类似的典型形态学特征；所得永生化猪肝星状细胞系传代10代后，细胞形态和特征与第1代细胞无明显差别，该构建的永生化猪肝星状细胞系可在药物筛选中应用。
一种构建永生猪肝星状细胞系方法应用

[发明专利]一种永生化山羊小肠上皮细胞系及其建立方法-CN201610700713.8在审
发明人：赵国琦;詹康;赵倩明;左晓昕;林淼;严康 -专利权人：扬州大学
申请日： 2016-08-22 - 公布日： 2016-10-26 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种永生化山羊小肠上皮细胞系及其建立方法。该方法步骤以下：通过组织块培养原代山羊小肠细胞，随后永生化原代培养的细胞，并通过标记刮除法纯化山羊小肠上皮细胞，最后建立永生化的山羊小肠上皮细胞系。该永生化山羊小肠上皮细胞在培养的过程中无需添加任何细胞生长因子，操作方便简单，且比原代细胞培养节省大量的成本；现有技术中通常采用先纯化再永生化细胞的方法，本发明方法采用标记法来逐步刮除纯化永生化的山羊小肠上皮细胞，避免了现有技术中因培养时间延长使山羊小肠上皮细胞衰老，最终造成细胞永生化失败的缺陷。
一种永生山羊小肠上皮细胞系及其建立方法

[发明专利]可逆性永生化细胞的制备方法-CN202180075178.0在审
发明人：押村光雄;田畑寿晃;香月康宏;宇野爱海 -专利权人：染色体移入股份公司;国立大学法人鸟取大学
申请日： 2021-11-05 - 公布日： 2023-07-11 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明的目的在于提供能够长时间使导入有永生化基因的细胞增殖而不会损伤该细胞的染色体、且能够除去永生化基因的可逆性永生化细胞的制备方法，以及大量获得能够克隆且质量稳定的可逆性永生化细胞的方法。本发明提供包括以下步骤的可逆性永生化细胞的制备方法：将携带选自由Bmi‑1基因、TERT基因和SV40T基因组成的组的一种或两种以上的永生化基因的染色体非整合型RNA病毒载体导入到哺乳动物的细胞中，在该细胞中使永生化基因表达；对得到的细胞进行培养，使其增殖。
可逆性永生细胞制备方法

[发明专利]一种永生化猪肝细胞大规模培养的方法-CN200810121994.7无效
发明人：李兰娟;潘小平;杜维波;喻成波;吕国良;虞晓鹏;章益民 -专利权人：浙江大学
申请日： 2008-11-06 - 公布日： 2009-03-25 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种永生化猪肝细胞大规模培养的方法，包括将收集的永生化猪肝细胞接种至转瓶中，经三层转瓶培养系统中旋转培养，用1.5-2.0％浓度的海藻酸钠溶液调整永生化猪肝细胞的浓度为1-2.5×10⁶个/mL；再调整浓度后得到的永生化猪肝细胞，采用一步法海藻酸-壳聚糖制备永生化猪肝细胞微囊；本发明还公开了一种微囊化永生化猪肝细胞。本发明提供的微囊化永生化猪肝细胞，可作为肝细胞源应用于生物型人工肝或肝细胞移植，本发明制备出的抗HCMV gBn1抗体，其优点为特异性强、灵敏度高。
一种永生猪肝细胞大规模培养方法

[发明专利]永生化的犬脂肪间充质干细胞的体外培养方法及其用途-CN201811247807.X在审
发明人：华进联;方佳;滕鑫;温新宇;晏原 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2018-10-25 - 公布日： 2019-02-12 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明为一种永生化的犬脂肪间充质干细胞的体外培养方法及其用途，其利用已经建立的永生化犬脂肪间充质干细胞系，对犬皮肤缺损进行治疗，比较了细胞移植与非移植对创口愈合速度及疤痕平整度的影响，为永生化犬脂肪间充质干细胞系治疗犬皮肤缺损的临床应用提供参考本发明的技术方案是：永生化的犬脂肪间充质干细胞在治疗犬皮肤缺损中的应用及永生化的犬脂肪间充质干细胞的体外培养方法，体外培养包括以下步骤：1）永生化的犬脂肪间充质干细胞的复苏；2）永生化的犬脂肪间充质干细胞的传代
永生化脂肪间充质干细胞体外培养皮肤缺损干细胞系间充质脂肪治疗传代创口临床应用细胞移植平整度疤痕与非愈合复苏移植参考应用

[发明专利]一种永生化的尿液来源细胞株及其构建方法-CN201810052365.7在审
发明人：王淋立;关春燕;陈月花;张雁 -专利权人：皓昇莱生物制药有限公司;王淋立
申请日： 2018-01-19 - 公布日： 2018-05-25 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种永生化的尿液来源细胞株及其构建方法，属于生物技术领域。所述永生化的尿液来源细胞株是将携带有永生化基因或DNA片段的重组质粒转染进尿液来源细胞中所得到。申请人将SV40LT重组质粒转染进尿液来源细胞中，构建了永生化的尿液来源细胞株。并通过比较，优选出更为安全可靠的基因编辑方法得到永生化的尿液来源细胞株。所述永生化的尿液来源细胞株培养到第35代时，细胞形态非常年轻，且仍无明显衰老现象；细胞几乎呈对数增长，是培养到第4代原代尿液来源细胞增殖速度的3倍。鉴定分析显示永生化的尿液来源细胞株各项指标均属正常。冻存1个月后复苏，细胞贴壁率高达95％，能够长期稳定的生长和传代。
来源细胞尿液永生化构建重组质粒转染传代生物技术领域长期稳定对数增长鉴定分析衰老现象细胞贴壁细胞形态基因冻存优选增殖复苏细胞生长携带

[发明专利]一种慢病毒载体及其在构建永生化细胞中的应用-CN201811276840.5在审
发明人：许澎;黄巧;胡清云 -专利权人：湖南丰晖生物科技有限公司
申请日： 2018-10-30 - 公布日： 2019-02-01 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种慢病毒载体及其在构建永生化细胞中的应用。本发明通过慢病毒感染将不同永生化关键基因有选择、针对性整合到目的细胞基因组中，不仅提高了永生化效率，而且不会使细胞中产生有害副产物。由于同时导入了两种永生化基因，使该质粒载体的应用范围扩大了，可以适用于更多的细胞种类，并且两组基因诱导永生化的机制有差异，能够互补提高永生化效率。加入了诱导型启动子，可以通过诱导剂来控制TERT的表达，降低了细胞的癌变可能，能更好控制细胞的永生化过程。
永生化细胞慢病毒载体永生化细胞构建应用基因工程技术诱导型启动子慢病毒感染细胞基因组范围扩大关键基因基因诱导质粒载体副产物诱导剂癌变两组整合基因

[发明专利]重组人永生化角质形成细胞系及其制备方法-CN201910043398.X在审
发明人：陈虹;王春仁;韩倩倩;付步芳;许建霞;王涵 -专利权人：中国食品药品检定研究院
申请日： 2019-01-17 - 公布日： 2019-03-26 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了重组人永生化角质形成细胞系及其制备方法。重组人永生化角质形成细胞系的制备方法为：向人永生化角质形成细胞导入特异DNA分子，获得重组人永生化角质形成细胞系；所述特异DNA分子从5’末端向3’末端依次包括ARE元件、SV40启动子和编码荧光酶的基因采用本发明提供的重组人永生化角质形成细胞系可以筛选致敏化合物。本发明具有重要的应用价值。
永生化角质形成细胞系制备角质形成细胞编码荧光致敏筛选基因应用

[发明专利]一种永生化人喉环后区细胞及其构建方法-CN202111385406.2有效
发明人：李湘平;谭嘉杰;鲁娟;戴远锋;莫婷婷 -专利权人：南方医科大学南方医院
申请日： 2021-11-22 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开一种永生化人喉环后区细胞，所述永生化人喉环后区细胞是在人喉腔环后区来源细胞中导入Bmi1基因构建而成，所述永生化人喉环后区细胞拥有体外无限增殖或接近于无限增殖的能力。本发明将Bmi1基因导入人喉环后区上皮原代细胞，从而构建永生化人喉环后区上皮细胞株，并经过试验研究发现，构建所得永生化人喉环后区细胞株能够减缓喉环后区上皮细胞衰老，保持细胞活性，为咽喉环后区良恶性疾病致病机制研究提供稳定可靠的细胞模型同时，本发明还公开了一种取材方便、可重复性强、便于操作的永生化人喉环后区细胞构建方法。
一种永生化人喉环后区细胞及其构建方法

[发明专利]永生化小鼠足细胞系及其制备方法、分化方法和应用-CN202310498714.9在审
发明人：徐安龙;黄光瑞;黄玉娇;刘文斌;耿洁;胡海坤;霍瑰阳;刘轩赫;王梦丹 -专利权人：北京中医药大学
申请日： 2023-05-06 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种永生化小鼠足细胞系的制备方法，包括：取6‑8天乳鼠肾脏，并分离得肾小球悬液；肾小球悬液培养得足细胞悬液；用携带SV40tsA58和嘌呤霉素抗性基因的慢病毒转染足细胞悬液中的足细胞，得转染细胞；转染细胞传代培养，筛选建立永生化小鼠足细胞系。永生化小鼠足细胞系及其在药物筛选中的应用。本发明具有降低永生化小鼠足细胞系的分化时间，提高永生化小鼠足细胞系的体外存活时间的有益效果。
永生小鼠细胞系及其制备方法分化应用

[发明专利]一种可控永生化的逆转录病毒载体和人脐带间充质干细胞及其构建方法-CN201910267989.5在审
发明人：张娇;邹翠云;张蓓;江福能;钟惟德;朱建国 -专利权人：广州辉园苑医药科技有限公司
申请日： 2019-04-03 - 公布日： 2019-08-09 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及了一种可控永生化的逆转录病毒载体和人脐带间充质干细胞及其构建方法。所述的构建方法，借助Tet‑on 3G系统构建含永生化因子的可控永生化逆转录病毒载体，包装逆转录病毒感染脐带间充质干细胞，通过添加诱导物诱导永生化因子基因的表达，将其转化为具有高增殖能力的永生化细胞；当需要将细胞用于正常生理或疾病治疗时，撤销诱导物，永生化因子基因处于转录关闭状态，细胞回复原代脐带间充质干细胞特性，在基因功能研究或是疾病治疗中都具有十分重要的意义。
永生化构建逆转录病毒载体可控人脐带间充质干细胞脐带间充质干细胞疾病治疗因子基因诱导物逆转录病毒感染基因功能研究生物技术领域永生化细胞细胞增殖能力正常生理转录诱导回复撤销转化

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