本发明公开了一种制备平菇球形病毒的抗血清的方法及应用,所述方法包括以平菇球形病毒的外壳蛋白作为免疫原免疫动物;所述平菇球形病毒的外壳蛋白为氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明首次公开了一种平菇球形病毒的抗血清,该血清不仅可以灵敏地检测平菇是否感染病毒还可以检测样品的带毒量,为该病毒的血清学检测以及平菇生产中该病害的防控提供理论基础。另外,目前还没有关于秀珍菇感染平菇球形病毒的报道,本发明首次公开了其在检测秀珍菇中的平菇球形病毒中的应用,也就是说本发明公开了一种平菇球形病毒的新寄主,为秀珍菇的病害防控也提供了一种新的思路。