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[发明专利]扩增植物组织中内生真菌ITS基因的方法及所用引物-CN201410045774.6有效
发明人：袁志林;章初龙;陈益存 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2014-02-08 - 公布日： 2014-06-04 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了用于扩增植物组织中内生真菌ITS基因的引物，该引物包括巢式PCR第一轮扩增引物对（正向引物NSA3，反向引物NLC2）和巢式PCR第二轮扩增引物对。本发明还同时提供了利用上述引物进行的扩增植物组织中内生真菌ITS基因的方法，包括植物组织基因组的提取，将提取所得的模板DNA进行PCR扩增，包括巢式PCR第一轮扩增和巢式PCR第二轮扩增。
扩增植物组织中内生真菌 its 基因方法所用引物

[发明专利]巢式多重PCR高通量测序文库制备方法及试剂盒-CN201980095420.3在审
发明人：杨林;张艳艳;陈芳;蒋慧 -专利权人：深圳华大智造科技股份有限公司
申请日： 2019-06-26 - 公布日： 2021-12-17 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：一种巢式多重PCR高通量测序文库制备方法及试剂盒，巢式多重PCR高通量测序文库制备方法包括：使用正向引物和反向引物对目标区域进行扩增，正向引物是正向特异性序列，反向引物包括3’端的反向特异性序列和5’端的第一通用测序序列；对第一轮PCR扩增的产物进行纯化；使用巢式引物、第一标签引物和第二通用引物对纯化后的产物进行扩增，其中巢式引物位于正向引物的下游，巢式引物包括5’端的第二通用测序序列和3’端的特异性序列，第一标签引物3’端序列和反向引物5’端的部分或全部序列相同，且第一标签引物还包括第一标签序列，第二通用引物3’端序列和巢式引物5’端的部分或者全部序列相同。巢式多重PCR高通量测序文库制备方法能够有效避免多重PCR扩增过程中产生的二聚体，并且采用巢式扩增方法大大增加PCR扩增的特异性。
多重 pcr 通量序文制备方法试剂盒

[发明专利]甘蔗白叶病病原巢式PCR检测方法-CN201110050056.4无效
发明人：卢文洁;黄应昆;李文凤;赵培方;王晓燕 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2011-03-02 - 公布日： 2011-08-17 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：一种甘蔗白叶病病原巢式PCR检测方法，取甘蔗病叶组织，通过CTAB法提取甘蔗病叶组织的总基因组DNA，应用巢式PCR技术对总基因组DNA依次进行第一轮PCR和第二轮PCR两次扩增，用1.0%的琼脂糖凝胶对巢式PCR扩增产物进行电泳检测，第一轮PCR扩增产物的DNA目标片段大小约为700bp，第二轮PCR扩增产物的DNA目标片段大小约为210bp；所说的两次扩增，第一轮PCR扩增采用的引物为MLOX/MLOY，第二轮PCR扩增采用的引物为P1/P2；本方法具有操作快速、简便、高效等特点。
甘蔗白叶病病原 pcr 检测方法

[发明专利]一种检测水体鸭粪污染的巢式PCR试剂盒及其检测方法-CN201510300317.1有效
发明人：张徐祥;何席伟;陈慧梅;于红霞;史薇 -专利权人：南京大学
申请日： 2015-06-05 - 公布日： 2018-09-11 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测水体鸭粪污染的巢式PCR试剂盒及其检测方法，属于水体污染检测领域。一种检测水体中鸭粪污染的巢式PCR试剂盒，包括两对巢式PCR引物、dNTP、PCR buffer、Taq酶、Mg2+溶液和ddH2O，该巢式PCR方法使用两轮PCR扩增，检测方法如下：提取待测水样DNA，以其为模板进行第一轮PCR扩增，引物为SDF、SDR，反应结束后，以第一轮PCR产物为模板，进行第二轮PCR扩增，引物为NDF、NDR，反应结束后，琼脂糖凝胶电泳检测158bp条带存在表明水体收受到鸭粪污染该方法通过巢式PCR扩增，大大增加了检测的灵敏度，可以检测到水中存在的微量鸭粪污染，并且具有良好的特异性，可直接应用于水体粪便污染检测及防治工作中。
一种检测水体污染 pcr 试剂盒及其方法

[发明专利]铁皮石斛内生细菌特异性巢氏PCR检测方法及所用引物-CN201310043895.2有效
发明人：胡秀芳;周晓风;于婕 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2013-02-05 - 公布日： 2013-06-05 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种巢式PCR扩增引物，包括第一次PCR扩增引物（fM1、rC5）和第二次PCR扩增引物（GC夹-f515、rC5）。本发明还同时公开了利用上述引物进行的铁皮石斛内生细菌的特异性巢氏PCR快速检测方法，包括如下步骤：1）、铁皮石斛总基因组DNA的提取；2）、特异性巢氏PCR扩增16S rRNA基因的特定片段：第一次PCR扩增时，退火温度为50-54℃；第二次PCR扩增时，退火温度为55-59℃；3）、DGGE分析：将巢氏PCR的第二次扩增产物进行DGGE电泳；4）、内生细菌的种属鉴定：选择清晰的DGGE条带，进行PCR扩增；将扩增片段进行克隆、测序和BLAST比对，确定种属特征。
铁皮石斛细菌特异性 pcr 检测方法所用引物

[实用新型]一种巢式PCR反应管-CN200420112525.6无效
发明人：陶生策;鲜飞军;程京;张琼;郭旻;蒋迪;鲁红丽 -专利权人：北京博奥生物芯片有限责任公司;清华大学
申请日： 2004-11-10 - 公布日： 2006-05-31 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种巢式PCR反应管。本实用新型所提供的巢式PCR反应管，包括管体和管盖，所述管盖的内侧面上还设有内管，所述内管上设有至少一个加样孔。本实用新型在PCR反应管的管盖上设有一个内管，而巢式PCR的第二轮PCR反应体系位于其中，进行完第一轮PCR扩增后再将置于内管中的第二轮反应体系通过离心、振动或其它方式进入到管体中进行第二轮PCR扩增，巧妙地实现了巢式PCR两轮扩增反应体系的物理隔离，避免了分步操作对PCR体系的污染，从而提高了巢式PCR反应的可靠性；而且还可以将巢式PCR的两轮反应体系分别制备成干剂预先存放于反应管中，可以方便试剂的运输本实用新型结构简单，可以广泛应用于各种巢式PCR反应。
一种 pcr 反应

[发明专利]一种通用型猪细小病毒巢式PCR引物组及其应用-CN201910056454.3在审
发明人：刘国平;李文静;常小云;王家福;胡利群;刘满 -专利权人：长江大学
申请日： 2019-01-22 - 公布日： 2019-05-03 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种通用型猪细小病毒巢式PCR引物组及其应用，包括外侧引物PPV‑O‑F、PPV‑O‑R和内侧引物PPV‑I‑F、PPV‑I‑R；本发明采用上述巢式PCR引物组进行巢式PCR检测猪细小病毒的方法，包括如下步骤：将待测样本提取DNA得到样本DNA；将所述样本DNA进行两次PCR扩增，第一次PCR扩增采用外侧引物PPV‑O‑F与PPV‑O‑R，第二次PCR扩增采用内侧引物PPV‑I‑F与PPV‑I‑R；每次PCR产物进行电泳检测猪细小病毒。本发明所提供的巢式PCR引物组是针对猪细小病毒的结构蛋白VP2中碱基序列设计出的两对特异性引物，并且对多种病毒病原进行扩增，只有猪细小病毒可以扩增出特异条带，具有特异性。本发明提供的巢式PCR检测方法特异性强、灵敏度高、抗干扰性能好，且可靠性强，克服了普通PCR检测灵敏度低，特异性差问题。
猪细小病毒巢式PCR引物内侧引物外侧引物巢式PCR 样本DNA 灵敏度通用型扩增抗干扰性能特异性引物病毒病原待测样本电泳检测碱基序列结构蛋白特异性强提取DNA 检测条带应用

[发明专利]一种检测水体鸡粪污染的巢式PCR试剂盒及其检测方法-CN201510300853.1在审
发明人：陈慧梅;何席伟;张徐祥;于红霞;史薇 -专利权人：南京大学
申请日： 2015-06-05 - 公布日： 2015-09-02 - 主分类号： C12Q1/6848 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测水体鸡粪污染的巢式PCR试剂盒及其检测方法，属于水体污染检测领域。一种检测水体中鸡粪污染的巢式PCR试剂盒，包括两对巢式PCR引物、dNTP、PCR buffer、Taq酶、Mg2+溶液和ddH2O，该巢式PCR方法使用两轮PCR扩增，检测方法如下：提取水样DNA，以其为模板进行第一轮PCR扩增，引物为SCF、SCR，反应结束后，以第一轮PCR产物为模板进行第二轮PCR扩增，引物为NCF该方法通过巢式PCR扩增，大大增加了检测的灵敏度，可以检测到水中存在的微量鸡粪污染，并且具有良好的特异性，可直接应用于水体粪便污染检测及防治工作中。
一种检测水体污染 pcr 试剂盒及其方法

[发明专利]一种实时荧光巢式PCR扩增方法-CN202310726268.2在审
发明人：王一凡;胡鹏程;于洋;李明明;蒲珏 -专利权人：北京艾克伦医疗科技有限公司
申请日： 2023-06-19 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： C12Q1/6848 文献下载
摘要：本文公开了一种实时荧光巢式PCR核酸扩增方法，该方法采用阻断物来消弭或降低了外引物对第二轮PCR扩增的影响，可以无需开盖纯化或稀释第一轮PCR扩增产物，在单管中依次进行PCR扩增，大大简化了操作复杂程度的同时，避免了开盖产生气溶胶的风险，保留了巢式PCR的高灵敏度和特异度。
一种实时荧光 pcr 扩增方法

[发明专利]一种检测CYP2D6_C2850T基因多态性的引物及其方法-CN201511006951.0在审
发明人：梁耀铭;于世辉;赵薇薇;燕启江;胡昌明;罗锦霞 -专利权人：广州金域检测科技股份有限公司
申请日： 2015-12-30 - 公布日： 2016-05-04 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供的CYP2D6_C2850T基因多态性的引物，包括巢式PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；所述巢式PCR扩增引物包括巢式A轮PCR扩增引物和巢式B轮PCR扩增引物。
一种检测 cyp2d6_c2850t 基因多态性引物及其方法

[发明专利]一种检测CYP2D6_G4180C基因多态性的引物与方法-CN201511006949.3在审
发明人：胡昌明;梁耀铭;于世辉;赵薇薇;燕启江;罗锦霞 -专利权人：广州金域检测科技股份有限公司
申请日： 2015-12-30 - 公布日： 2016-04-20 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供的CYP2D6_G4180C基因多态性的引物，包括巢式PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；所述巢式PCR扩增引物包括巢式A轮PCR扩增引物和巢式B轮PCR扩增引物。
一种检测 cyp2d6_g4180c 基因多态性引物方法

[发明专利]一种CYP2D6_G1661C基因多态性的引物及其检测方法-CN201511006947.4在审
发明人：胡昌明;梁耀铭;于世辉;赵薇薇;燕启江;郭周萍 -专利权人：广州金域检测科技股份有限公司
申请日： 2015-12-30 - 公布日： 2016-04-20 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供的CYP2D6_G1661C基因多态性的引物，包括巢式PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；所述巢式PCR扩增引物包括巢式A轮PCR扩增引物和巢式B轮PCR扩增引物。
一种 cyp2d6_g1661c 基因多态性引物及其检测方法

[发明专利]一种CYP2D6_C100T基因多态性的引物及其检测方法-CN201511006948.9在审
发明人：胡昌明;梁耀铭;于世辉;赵薇薇;燕启江;罗锦霞 -专利权人：广州金域检测科技股份有限公司
申请日： 2015-12-30 - 公布日： 2016-04-20 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供的CYP2D6_C100T基因多态性的引物，包括巢式PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；所述巢式PCR扩增引物包括巢式A轮PCR扩增引物和巢式B轮PCR扩增引物。
一种 cyp2d6_c100t 基因多态性引物及其检测方法

[发明专利]一种检测CYP2D6_G3183A基因多态性的引物及其方法-CN201511007136.6在审
发明人：胡昌明;梁耀铭;于世辉;赵薇薇;燕启江;罗锦霞 -专利权人：广州金域检测科技股份有限公司
申请日： 2015-12-30 - 公布日： 2016-05-25 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供的CYP2D6_G3183A基因多态性的引物，包括巢式PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；所述巢式PCR扩增引物包括巢式A轮PCR扩增引物和巢式B轮PCR扩增引物。
一种检测 cyp2d6_g3183a 基因多态性引物及其方法

[发明专利]柑桔黄脉病毒的巢式RT-PCR引物组、检测方法及试剂盒-CN201410451332.1无效
发明人：周彦;陈洪明;王雪峰;李中安;周常勇 -专利权人：西南大学柑桔研究所
申请日： 2014-09-05 - 公布日： 2014-11-19 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种柑桔黄脉病毒的巢式RT-PCR引物组、检测方法及试剂盒,属于分子生物学技术领域。本发明提供了柑桔黄脉病毒的巢式RT-PCR外巢引物对CYVCV-1f、CYVCV-1r和内巢引物对CYVCV-2f、CYVCV-2r，利用外巢引物对进行第一轮RT-PCR扩增，再以第一轮RT-PCR扩增产物为模板用内巢引物对进行第二轮PCR扩增，检测第二轮PCR产物，获得469bp的PCR产物的待测样品即为受到柑桔黄脉病毒侵染的样品。本发明操作简便、重复性好、准确性高，其灵敏度是常规RT-PCR的100倍，对处于潜伏期的病毒也能及时检测到。
柑桔病毒 rt pcr 引物检测方法试剂盒

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