本发明属于水产生物技术领域,公开了一种用于中华鳖遗传性别鉴定的分子标记及方法,采用RAD技术对中华鳖雌雄个体进行测序,筛选雌雄特异性片段;根据雌雄特异性片段进行雌性基因组Walking,获得6532bp的特异性片段SEQ ID NO:1;基于特异性片段设计引物,进行引物筛选和验证获得特异性引物;采集中华鳖裙边组织,提取中华鳖基因组DNA,利用引物对在中华鳖个体中进行扩增;扩增结果进行电泳检测;进行遗传性别的鉴定本发明解决了目前尚未见到中华鳖性别特异性标记用于遗传性别的鉴定,具有原创性。本发明准确鉴定成功率达到100%。
本发明公开了一种中华绒螯蟹雄性特异Etse基因及其应用,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,雄性特异分子标记引物如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示,上述中华绒螯蟹雄性特异Etse基因、其编码蛋白或雄性特异分子标记引物用于中华绒螯蟹性别鉴定,鉴定方法包括:采用雄性特异分子标记引物进行PCR扩增,反应结束后进行电泳检测,结果显示一条特异性条带的中华绒螯蟹为雄性,电泳结果显示没有特异性条带的中华绒螯蟹为雌性,方法简单高效,可在分子水平上快速实现中华绒螯蟹的性别鉴定。
本发明涉及分子生物学中华绒鳌蟹抗脂多糖因子基因克隆及体外重组表达技术,中华绒鳌蟹抗脂多糖因子基因,具有序列表SEQ ID No:1中碱基序列。本发明利用构建的中华绒鳌蟹cDNA文库,采用RACE技术及体外重组表达技术,对中华绒鳌蟹抗脂多糖因子进行了研究,首次从中华绒鳌蟹中克隆到抗脂多糖因子的cDNA序列,该基因具有序列表中所示的序列,并利用原核重组技术表达了具有较强杀菌活性的重组蛋白