本发明公开了一种异源可溶性表达肝靶向干扰素的方法,具体步骤为S1.将肝靶向干扰素突变成SEQ ID NO:2所示的突变肝靶向干扰素;S2.将编码SEQ ID NO:2所示突变肝靶向干扰素基因的核苷酸序列中的大肠杆菌稀有密码子替换成大肠杆菌非稀有密码子,优化后的编码SEQ ID NO:2所示突变肝靶向干扰素基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示;S3构建表达突变肝靶向干扰素的重组表达载体,将重组表达载体导入大肠杆菌,获得可溶性表达突变肝靶向干扰素的重组大肠杆菌菌株,诱导重组大肠杆菌表达,获得可溶性表达的突变肝靶向干扰素。本发明首次实现了肝靶向干扰素的可溶性表达,表达产物无需变复性等复杂工艺即可获得高纯度目的蛋白,有助于减化制备工艺、降低生产成本;同时通过对肝靶向干扰素进行改造,获得生物学活性更强的突变肝靶向干扰素。
本发明公开了一种肺癌诊断生物试剂,为一种肺癌特异性靶向细菌经多聚甲醛固定形成,所述的肺癌特异性靶向细菌表面展示有序列为SEQ ID No.1的多肽,所述的肺癌特异性靶向细菌可表达GFP蛋白,所述的肺癌特异性靶向细菌为一细菌本体中转入一表达载体,所述的表达载体中含有特异性靶向多肽基因和GFP基因,所述的表达载体可表达特异性靶向多肽和GFP蛋白,所述的特异性靶向多肽的序列为SEQ ID No.1。
本发明提供了靶向EGFRvⅢ并干扰IL‑6表达的嵌合抗原受体T细胞,包括靶向EGFRvⅢ的嵌合抗原受体CAR‑EGFRvⅢ以及干扰IL‑6表达的siRNA,CAR‑EGFRvⅢ包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向EGFRvⅢ的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列,靶向EGFRvⅢ的单链抗体包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列,干扰IL‑6表达的siRNA对应的DNA序列包括如SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列中的至少一种;其专一性地靶向表达EGFRvⅢ的肿瘤细胞,又可以干扰IL‑6表达,避免细胞因子表达,使其具有持久细胞活力和杀伤力。