本发明公开了一种海洋链霉菌磷脂酶D突变体和应用，所述的磷脂酶D突变体是在氨基酸序列为SEQ ID NO:1的基础上单点突变380位点氨基酸所得。本发明磷脂酶D突变体酶活力显著提高，实验测定突变体1(S380A)的酶活力是野生型的2.4倍，突变体2(S380F)的酶活力是野生型的1.1倍，突变体3(S380V)的酶活力是野生型的2.6倍，突变体4(S380M)的酶活力是野生型的1.2倍，突变体5(S380L)的酶活力是野生型的1.6倍。同时，本发明突变体的催化效率也显著提高，酶活力和催化性能的改善进一步提升了该酶的工业利用价值。
本发明公开了一种海洋链霉菌磷脂酶D突变体及其重组表达菌株的制备方法，所述的磷脂酶D突变体是在氨基酸序列为SEQ ID NO:1的亲本序列基础上发生如下突变：P343A；或Y383L；或P343A，Y383L相比于野生型，本发明突变体1的酶活力是野生型的1.3倍，突变体2的酶活是野生型的1.46倍，突变体3的酶活是野生型的3.9倍，突变体4的酶活是野生型的11.6倍。本发明获得的磷脂酶突变体活力得到显著提高。
本发明公开了一种醇脱氢酶突变体，为野生型醇脱氢酶的氨基酸发生如下任意一种情况的突变：野生型醇脱氢酶的序列中第35位丝氨酸突变为天冬氨酸；野生型醇脱氢酶的序列中第35位丝氨酸突变为天冬氨酸，且第36位精氨酸突变为异亮氨酸；野生型醇脱氢酶的序列中第34位丙氨酸、缬氨酸、或半胱氨酸突变为异亮氨酸，且第35位丝氨酸突变为天冬氨酸，且第36位精氨酸突变为异亮氨酸；野生型醇脱氢酶的序列中第13位丝氨酸突变为丙氨酸，且第34位丙氨酸、缬氨酸、或半胱氨酸突变为异亮氨酸，且第35位丝氨酸突变为天冬氨酸，且第36位精氨酸突变为异亮氨酸；所述的野生型醇脱氢酶的序列如SEQ ID NO：2、4、6或8中的任意一项所示。
本发明属于生物化学领域，具体涉及Taq酶突变体及其在SNP相关研究上的应用。具体技术方案为：一种Taq酶突变体，所述Taq酶突变体由野生型C‑Taq酶突变而来，野生型C‑Taq酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，在野生型C‑Taq酶基础上至少进行如下突变：将所述野生型C‑Taq酶的506号位点的苏氨酸突变为赖氨酸。本发明通过对野生型C‑Taq酶的关键活性位点进行的分析并进行定点突变，并使用高低GC目的片段的多对SNP分型引物探针对候选突变酶进行测试，筛选到两个对单碱基错配有更好区分能力的酶。本发明提供的突变体酶的单碱基错配探针起峰更低，分型准确度更高。本发明提供的突变体酶对中高低GC位点都能很好扩增，普适应广；使用这些突变体酶可以有效节省筛选MGB探针的成本。
