本发明公开了一种硝基还原酶基因cnrB及其硝基还原酶和应用,该基因cnrB的核苷酸序列为SEQ ID NO.1,该基因cnrB编码的硝基还原酶CnrB的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。本发明克隆到一种硝基还原酶基因cnrB,该基因为一种氯霉素硝基还原酶基因,比对结果表明该基因为一个新的基因,全长为744bp,编码247个氨基酸;本发明硝基还原酶基因cnrB编码的硝基还原酶CnrB能够将氯霉素中的硝基还原成氨基,该硝基还原酶CnrB可用于环境中氯霉素残留的去除及药物合成的生物转化,以及转基因作物的构建,具有非常重要的理论和应用价值。
本发明公开了一种酮还原酶基因及其应用。本发明酮还原酶基因,序列如SEQ ID NO.1所示,其编码的酮还原酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。一种生产酮还原酶的基因工程菌,其中包含本发明所述的酮还原酶基因。一种酮还原酶的制备方法,包括如下步骤:培养本发明生产酮还原酶的基因工程菌,获得重组表达的酮还原酶。以该重组表达制备的酮还原酶为催化剂,不对称还原酮类化合物制备光学活性手性醇,底物转化率达96.8%,还原产物的ee大于99%。
本发明公开了一种硝基还原酶基因dnrA及其硝基还原酶和应用,该基因dnrA的核苷酸序列为SEQ ID NO.1,该基因dnrA编码的硝基还原酶DnrA的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。本发明克隆到一种硝基还原酶基因dnrA,该基因为一种二苯醚类除草剂硝基还原酶基因,全长为780bp,编码259个氨基酸;本发明硝基还原酶基因dnrA编码的硝基还原酶DnrA能够将二苯醚类除草剂中的硝基还原成氨基降解和转化二苯醚类除草剂,该硝基还原酶DnrA以及含有硝基还原酶基因dnrA的基因工程菌可用于污染农田和环境水体中二苯醚类除草剂残留的去除及药物合成的生物转化,具有非常重要的理论和应用价值。
本发明公开一种还原酶LX05基因,含有该基因的工程菌及其应用。所述还原酶LX05基因的核苷酸序列为SEQID NO.1;所述还原酶LX05基因所编码的还原酶蛋白质的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。将还原酶LX05基因构建重组质粒再导入E.coliBL21(DE3)即获得含有该基因的基因工程菌。所述还原酶LX05基因编码的还原酶蛋白质或含有该还原酶基因的基因工程菌在合成手性化合物(优选(R)‑[3,5‑二(三氟甲基)苯基]乙醇)具有立体选择性好、催化活性高和产物光学纯度高等特性,且能实现高浓度
本发明公开了一种羰基还原酶突变体及其编码基因和应用。羰基还原酶突变体基因,序列如SEQ ID NO.1所示,其编码的羰基还原酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。一种生产羰基还原酶的基因工程菌,其中包含本发明所述的羰基还原酶基因。一种羰基还原酶的制备方法,包括如下步骤:培养本发明生产羰基还原酶的基因工程菌,获得重组表达的羰基还原酶。以该重组表达制备的羰基还原酶为催化剂,不对称还原羰基类化合物制备光学活性手性醇,实现重组羰基还原酶的制备,并将其用于不对称催化合成(R)‑2‑羟基‑4‑苯基丁酸乙酯。底物转化率达96.8%,还原产物的ee大于99%。
本发明公开了一种烯还原酶突变体及其编码基因和应用。一种烯还原酶突变体基因,核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。一种烯还原酶突变体基因,核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。一种烯还原酶突变体的制备方法,包括如下步骤:培养烯还原酶突变体的基因工程菌,获得重组的烯还原酶突变体。本发明提供一种催化活性高、热稳定性好的烯还原酶突变体及其编码基因和应用。
本发明提供了一种亚胺还原酶突变体及其编码基因和应用,亚胺还原酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO 3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31所示;亚胺还原酶突变体基因核苷酸序列如SEQ ID NO 4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32所示;重组载体包含亚胺还原酶突变体基因;用于生产亚胺还原酶突变体的基因工程菌包含重组载体。亚胺还原酶突变体的制备方法,包括培养基因工程菌,获得重组的亚胺还原酶突变体。本发明提供了一种反转亚胺还原酶的突变方式,可同时提高酶对于式Ⅰ所示化合物的活力,可用于式b结构的环状亚胺合成反应。
本发明公开了一种拟南芥γ‑INF诱导的溶酶体巯基还原酶基因及其应用,该γ‑INF诱导的溶酶体巯基还原酶基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示,其表达蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明首次从植物拟南芥中克隆出γ‑INF诱导的溶酶体巯基还原酶基因cDNA全长序列,并成功表达出溶酶体巯基还原酶蛋白,采用体外巯基蛋白酶活性检测方法测定体外表达的拟南芥γ‑INF诱导的溶酶体巯基还原酶对人IgG的巯基还原酶活性,结果显示该蛋白具有很强的巯基还原酶活性,在植物免疫研究领域将有广泛的用途。
本发明涉及应用微生物与酶工程领域,尤其是一种酮还原酶、酮还原酶突变体及其编码基因和应用;所述酮还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示;酮还原酶基因用于编码所述酮还原酶,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述酮还原酶突变体的氨基酸序列如SEQ IDNO.3所示,酮还原酶突变体基因用于编码所述的酮还原酶突变体,其核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示。本发明中的酮还原酶及其突变体来源于乳酸假单胞菌(Pseudomonas lactis),其催化不对称还原制备度洛西汀中间体中的底物浓度达到80g/L,手性纯度值大于99%,具有较高的工业化应用潜力。