本发明公开了一种轮状病毒的环介导等温扩增检测引物组和检测方法。检测引物组包括上游外引物F3、下游外引物B3、上游内引物FIP、下游内引物BI P,分别如SEQ ID NO.1、2、3和4所示。本发明建立了轮状病毒的LAMP检测方法,本检测方法根据轮状病毒的基因保守序列设计了两个特异性内引物和两个特异性外引物,该保守基因序列为轮状病毒所共有。本发明采用LAMP技术,特异性强,且比PCR检测方法有更高的灵敏度,但不需昂贵的PCR仪,只需普通的水浴箱即可,且结果不必用凝胶电泳方法来观察,使用荧光染料来观察即可,简单而快速,可用于轮状病毒的检测,
本发明提供一种猪轮状病毒VP6抗原基因,其氨基酸序列为SEQ ID NO2;编码上述抗原的核苷酸片段,其一种序列为SEQ ID NO1。本发明筛选获得了一个新型的猪轮状病毒VP6基因,利用pET28a(+)表达性载体构建了能表达猪轮状病毒VP6基因1的大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌。经SDS‑PAGE分析,表达出了重组目的蛋白。将重组蛋白纯化后制备成基因工程亚单位疫苗,对猪轮状病毒具有显著的免疫效果。
本发明涉及基因工程领域,具体公开了一种大熊猫轮状病毒CH‑1毒株VP7蛋白的重组载体、基因工程菌及其应用。本发明的重组载体,含有大熊猫轮状病毒CH‑1毒株VP7蛋白的编码基因。含有本发明重组载体的工程菌表达的大熊猫轮状病毒CH‑1毒株VP7蛋白具有良好的生物活性和免疫原性,蛋白表达量大,极大降低了生产成本,为大熊猫轮状病毒(giant panda rotavirus,GPRV
本发明公开了一种检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的试剂盒,它包括SEQ ID NO1~2、SEQ ID NO3~4和SEQ ID NO5~6所示引物对,分别特异扩增猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因。本发明还公开了SEQ ID NO1~2、SEQ ID NO3~4和SEQ ID NO5~6所示引物对在制备检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的试剂中的用途。本发明检测试剂盒可以准确、有效的检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒,且特异性强、灵敏度高、耗时短,检测快速,应用前景良好。