本发明公开了一种诺卡氏菌核酸保守双管家基因,该诺卡氏菌核酸保守双管家基因为16S rDNA和topA,topA管家基因包括topA全长基因topAQ和topA核心鉴定片段topAH,三个基因的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:7~9所示,还公开了用于扩增诺卡氏菌核酸保守双管家基因的引物,引物包括16S rDNA引物、topAQ引物和topAH引物,三对引物的上、下游序列依次如SEQ ID NO:1~6所示该双管家基因和引物可先后有效区分诺卡氏菌种间和种内的差异,有效缩短中间鉴定步骤,大大提高鉴定的准确率。还公开了上述引物及含有所述引物的试剂盒在制备具有检测诺卡氏菌病效果的药物中的应用。