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[发明专利]一种3D打印仿生角膜缘移植物及其制备方法和用途-CN202211465253.7在审
发明人：王乐滢;梁庆丰;刘文广;聂雄峰 -专利权人：首都医科大学附属北京同仁医院
申请日： 2022-11-22 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： A61L27/38 文献下载
摘要：本发明提供的一种3D打印仿生角膜缘移植物及其制备方法和用途，其仿生角膜缘移植物包括相互叠置的角膜缘上皮层和角膜缘微环境层，并通过分别基于LESC细胞，以及角膜缘基质干细胞、黑色素细胞和微血管内皮细胞配置的生物墨水本发明提供的3D打印仿生角膜缘移植物及其制备方法和用途通过将3D生物打印技术重建角膜缘的立体结构，并将其用于角膜缘移植，进而达到治疗角膜缘干细胞缺乏，促进角膜上皮愈合，减少角膜组织的瘢痕形成，提高视力的目的
一种打印仿生角膜移植及其制备方法用途

[发明专利]用于通过利用羊膜载玻片支架培养角膜缘干细胞的方法-CN201680076831.4有效
发明人：郑素享;李炫姃;徐庆律 -专利权人：加图立大学校产学协力团
申请日： 2016-07-22 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： C12N5/079 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于在羊膜载玻片支架上培养角膜缘组织，从而能够有效地增加角膜缘组织衍生的上皮细胞片中的角膜缘干细胞的比例，以及能够培养所述角膜缘干细胞的方法。根据本发明，角膜缘组织衍生的上皮细胞片中的角膜缘干细胞的比例可以稳定且迅速地增加，因此当将角膜缘组织衍生的上皮细胞片移植到患有角膜缘干细胞缺陷的患者中时，可以提高成功率。
用于通过利用羊膜载玻片支架培养角膜干细胞方法

[发明专利]一种构建组织工程角膜缘的方法-CN201611044670.9有效
发明人：周庆军;董沐晨;史伟云;杨玲玲;段豪云 -专利权人：山东省眼科研究所
申请日： 2016-11-24 - 公布日： 2019-11-19 - 主分类号： A61L27/36 文献下载
摘要：本发明涉及生物工程医疗材料领域，公开了一种构建组织工程角膜缘的方法，包括以下步骤：将含前弹力层的新鲜猪角巩膜缘基质置于添加了去垢剂和核酸酶的脱细胞角膜缘保护液中进行震荡脱细胞处理；将所述脱细胞后的角膜缘置于脱细胞角膜缘保护液中漂洗，得到脱细胞角膜缘；将种子细胞接种在所述脱细胞角膜缘上进行体外扩增，当种子细胞在脱细胞角膜缘上扩增达到3～5层时，得到组织工程角膜缘。其中，所述脱细胞角膜缘保护液为含有5～12g/L透明质酸、5～20g/L硫酸软骨素、3～10g/L右旋糖酐和2.5～5mg/L妥布霉素的PBS缓冲液。本发明的组织工程角膜缘材料可替代人角膜缘。
一种构建组织工程角膜方法

[发明专利]人成纤维细胞滋养的人角膜缘干细胞组织工程产品及制备-CN200410019342.4无效
发明人：张晓敏;孙慧敏;李筱荣 -专利权人：天津医科大学眼科中心
申请日： 2004-05-27 - 公布日： 2005-07-06 - 主分类号： C12N5/08 文献下载
摘要：一种以人角膜缘成纤维细胞为滋养层的人角膜缘干细胞—羊膜组织工程复合体，其特征在于：在组织学形态上接近人角膜上皮形态，在免疫学表型上与人角膜缘上皮类似，其超微结构显示细胞与细胞之间的连接发育成熟，上皮细胞与羊膜载体之间为紧密的粘连其培养方法依照下列步骤完成：①人角膜缘干细胞的体外培养载体—羊膜的制备；②人角膜缘成纤维细胞滋养层的制备；③人角膜缘上皮细胞悬液的制备；④人角膜缘干细胞—羊膜复合体的培养。本人角膜缘干细胞—羊膜复合体优点是：具有和人角膜缘上皮相似的表型，为治疗角膜缘干细胞缺陷性眼表疾病提供了安全而有效的生物组织工程产品。
纤维细胞滋养角膜干细胞组织工程产品制备

[发明专利]冻存自体角膜缘干细胞的无饲养层构建角膜上皮方法-CN200410026154.4无效
发明人：屈雷;王馨;窦忠英 -专利权人：西北农业科技大学
申请日： 2004-05-20 - 公布日： 2005-02-16 - 主分类号： C12N5/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种冻存自体角膜缘干细胞的无饲养层构建角膜上皮方法，将自体角膜缘干细胞体外长期保存，可以满足在不同的实验条件下，对角膜缘干细胞的运输、保存和增殖的要求。并用保存的角膜缘干细胞采用无饲养层的方法构建角膜上皮植片，实现临床上角膜缘干细胞缺损后的角膜上皮自体重建；本发明能够成功构建的人工角膜上皮植片，自体移植到角膜缘干细胞缺失的角膜表面，复明效果明显。
角膜干细胞饲养构建上皮方法

[发明专利]角膜缘干细胞及其培养方法和应用-CN201610356834.5在审
发明人：曾宪卓;鲁菲 -专利权人：深圳爱生再生医学科技有限公司
申请日： 2016-05-26 - 公布日： 2016-09-21 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明公开了一种角膜缘干细胞及其培养方法和应用，其中，该角膜缘干细胞的培养方法包括步骤如下：获取可增殖角膜缘组织；将所述可增殖角膜缘组织加入含FBS和Ca²⁺的MEM培养基中培养；本发明角膜缘干细胞的培养方法可以抑制角膜缘干细胞的分化，避免角膜缘干细胞因分化而产生其他细胞，保证培养得到的角膜缘干细胞的纯度，降低分化程度，从而提高了移植角膜缘干细胞治疗相应眼部疾病的疗效。
角膜干细胞及其培养方法应用

[发明专利]角膜缘干细胞原代培养方法-CN201811178859.6有效
发明人：徐彬;樊廷俊;田成磊;郑明月 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2018-10-10 - 公布日： 2021-09-24 - 主分类号： C12N5/079 文献下载
摘要：本发明涉及一种角膜缘干细胞原代培养方法。其特征在于经庆大霉素溶液处理后的角膜缘组织剪碎后置于组织消化液中消化、过滤，并将滤液离心后获得的角膜缘组织细胞沉淀进行短暂冻存，再将过滤剩余的组织块（即滤渣）用角膜缘干细胞滋养层培养液重悬，接种于用包被液预处理的细胞培养板进行培养，获得角膜缘成纤维细胞，然后用丝裂霉素C溶液处理生长至对数期的角膜缘成纤维细胞，制成角膜缘干细胞滋养层，最后复苏短暂冻存的组织细胞，用角膜缘干细胞原代培养液重悬后，接种在铺有角膜缘干细胞滋养层的细胞培养板中进行原代培养即得该角膜缘干细胞安全性高、稳定性好，完好地满足了临床治疗的高要求。
角膜干细胞培养方法

[发明专利]一种便于使用的组织工程角膜上皮植片及其制备、应用方法-CN202111548044.4在审
发明人：梁庆丰;王乐滢;韦振宇;张子俊;陈前坤 -专利权人：首都医科大学附属北京同仁医院
申请日： 2021-12-16 - 公布日： 2022-08-19 - 主分类号： A61F2/14 文献下载
摘要：本发明提供一种便于使用的组织工程角膜上皮植片，属于眼科治疗材料领域，所述植片包括支架，以及与所述支架凹面贴合的角膜缘上皮干细胞，以及贴合在所述角膜缘上皮干细胞上的羊膜，以及贴合在所述羊膜上的角膜缘微环境细胞本发明可使患者无需手术，仅通过简单的类似佩戴隐形接触镜的方式，将植片放置于角膜上即可实现角膜缘上皮及其微环境的移植重建，从而治疗角膜缘干细胞缺乏，促进缺损的角膜上皮愈合，减少角膜组织的瘢痕形成。
一种便于使用组织工程角膜上皮及其制备应用方法

[发明专利]一种脱细胞角膜缘保护液及脱细胞角膜缘的制备方法-CN201611044689.3有效
发明人：史伟云;周庆军;董沐晨 -专利权人：山东省眼科研究所
申请日： 2016-11-24 - 公布日： 2019-11-19 - 主分类号： A01N1/00 文献下载
摘要：本发明涉及生物工程医疗材料领域，公开了一种脱细胞角膜缘保护液及脱细胞角膜缘的制备方法。本发明的脱细胞角膜缘保护液的成分为含有5～12g/L透明质酸、5～20g/L硫酸软骨素、3～10g/L低分子右旋糖酐和2.5～5mg/L妥布霉素的PBS缓冲液。将含前弹力层的新鲜猪角巩膜缘基质密封于所述脱细胞角膜缘保护液中，采用高静压处理破碎细胞；将细胞破碎后的角膜缘置于添加了去垢剂和核酸酶的所述脱细胞角膜缘保护液中进行震荡脱细胞处理；将脱细胞后的角膜缘置于所述脱细胞角膜缘保护液中漂洗完成制备采用本发明的方法所获取的脱细胞角膜缘，脱细胞彻底，最小的减少了对角膜缘结构的破坏，生物相容性好，有利于自体细胞增殖爬行。
一种细胞角膜保护制备方法

[发明专利]一种角膜缘组织的保存方法-CN201210220833.X有效
发明人：吴护平;董诺;李程;刘祖国 -专利权人：厦门大学附属厦门眼科中心
申请日： 2012-06-29 - 公布日： 2012-10-17 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开一种角膜缘组织的保存方法，包括对新鲜角膜缘组织进行消毒的步骤以及对消毒后的新鲜角膜缘组织进行空气暴露保存的步骤。该空气暴露保存的步骤是将新鲜角膜缘组织置于可透水的铺膜上，该铺膜下为可提供角膜缘组织营养成分的保存液或细胞培养基，角膜上皮则直接与空气接触，该空气暴露保存的培养环境温度为0-37℃，氧气浓度为0-20%与传统浸没保存相比，本发明角膜缘组织结构保存更完整，角膜上皮不会出现明显凋亡，角膜缘干细胞能保持较高活性，并且还具有制作流程简单、可靠、易于实施和成本低等功效。
一种角膜组织保存方法

[发明专利]一种角膜缘干细胞的冻存液及冻存方法-CN201610237666.8有效
发明人：葛啸虎;陈海佳;王一飞;吴子杰 -专利权人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
申请日： 2016-04-14 - 公布日： 2018-06-12 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及干细胞领域，公开了角膜缘干细胞的冻存液及冻存方法。本发明所述角膜缘干细胞的冻存液包括CHIR99021。与常规角膜缘干细胞的冻存液相比，采用本发明所述角膜缘干细胞的冻存液冻存后复苏，不仅在细胞活性上明显高于其他常规冻存液，细胞增殖能力也优于常规细胞冻存液，可以用于角膜缘干细胞的长期保存及应用。本发明所述角膜缘干细胞的冻存方法将角膜缘干细胞消化、离心后，去除上清，加入本发明所述角膜缘干细胞的冻存液分装于冻存管中冻存。与常规的冻存方法相比，本发明角膜缘干细胞的冻存方法冻存的细胞复苏后不仅在细胞活性上明显高于其他常规方法，细胞增殖能力也优于常规的冻存方法。
角膜缘干细胞冻存冻存液细胞增殖能力细胞活性常规的常规细胞长期保存细胞复苏冻存管干细胞分装去除复苏消化应用

[发明专利]一种无血清培养角膜缘基质干细胞并于体外诱导成球和诱导分化的方法-CN201810574667.0有效
发明人：欧阳宏;朱丽琼 -专利权人：中山大学中山眼科中心
申请日： 2018-06-06 - 公布日： 2022-08-26 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：本发明公开了一种无血清培养角膜缘基质干细胞及其诱导分化和干细胞成球的方法。本发明还同时提供了用于体外诱导角膜缘基质干细胞成球或分化成角膜缘基质细胞的培养基组合。本发明所使用的无血清培养基组合，能提供细胞生长增殖所需的充足营养与良好环境，能够稳定的在体外扩增培养角膜缘基质干细胞，而且能确保扩增培养后仍保持角膜缘基质干细胞的干性以及特异性。同时成功构建了诱导分化成角膜基质细胞的体系，可用于角膜缘基质干细胞的实验研究、角膜病变的细胞治疗以及角膜损伤的移植，具有广泛的科学效益和社会经济效益。
一种血清培养角膜基质干细胞体外诱导分化方法

[发明专利]一种简易角膜缘干细胞分离和体外培养试剂盒及方法-CN201410062366.1在审
发明人：马蕾;程潇;于花 -专利权人：山西医科大学
申请日： 2014-02-22 - 公布日： 2015-08-26 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明涉及一种简易原代角膜缘干细胞分离和体外培养试剂盒及方法。所述简易原代角膜缘干细胞分离和体外培养试剂盒包括：组织清洗液、冷消化液、热消化液和培养液。所述简易原代角膜缘干细胞分离和体外培养方法包括下述步骤：角膜缘组织提取、消化、体外培养。使用本发明所述的简易原代角膜缘干细胞分离和体外培养试剂盒及方法进行角膜缘干细胞分离和体外培养，操作简单，干细胞得率高，所得原代干细胞损伤少，增值能力强，体外培养成功率高，重现性好。
一种简易角膜干细胞分离体外培养试剂盒方法

[发明专利]角膜缘干细胞及其制备方法-CN201910406925.9有效
发明人：武征;王颖薇;徐李玲;何程智;李国正 -专利权人：广州市亮目生物科技有限公司
申请日： 2019-05-16 - 公布日： 2021-04-27 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：本发明涉及一种高活性角膜缘干细胞及其制备方法，其制备方法包含以下步骤：获取角膜组织，将待用角膜组织预处理；向预处理后的角膜组织中加入含有细胞诱导剂的细胞冻存液；冷冻加有细胞冻存液的角膜组织；所述的细胞诱导剂是可诱导角膜组织中的细胞局部发生炎症或应激反应该方法在细胞培养前通过简单的低温冷冻操作即可在角膜组织中实现角膜缘干细胞与成熟分化的各类角膜细胞的筛选，同时可实现高活性角膜缘干细胞的长期冷冻保存，该方法无需特定的仪器设备，操作简便，筛选效率高，筛选细胞纯度高，可提高角膜缘干细胞的比例和活性。
角膜干细胞及其制备方法

[发明专利]一种治疗翼状胬肉的方法-CN201410195998.5无效
发明人：王晋平 -专利权人：王晋平
申请日： 2014-05-09 - 公布日： 2014-08-06 - 主分类号： A61F9/007 文献下载
摘要：本发明采用角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉，既重建修复了巩膜裸露区的球结膜，又重修复了角膜缘局部上皮组织，为角膜上皮提供了健康的干细胞并重建了角膜缘屏障功能。阻止了结膜上皮和新生血管侵入角膜。本发明应用角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉，具有手术快捷、安全，手术后不复发的优点。
一种治疗翼状胬肉方法

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