本发明公开了一种含有抗草甘膦基因的植物表达载体。所述植物表达载体为含两个拷贝的抗草甘膦基因的环形载体:所述抗草甘膦基因编码氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示序列的蛋白质或氨基酸序列与SEQ ID NO.1相比有一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加、且具有草甘膦抗性的蛋白质;所述两个拷贝的抗草甘膦基因分别被来自棉花的1,5‑二磷酸核酮糖羧化酶基因启动子和来自拟南芥激动蛋白基因的启动子驱动。本发明证明,导入本发明的植物表达载体的转基因棉花具有非常强的草甘膦抗性。本发明对于进一步培育高抗草甘膦植物及其应用具有非常重要的意义。