本发明公开了一种CDC42‑K153位点乙酰化的特异性抗体、制备方法及应用,涉及生物技术领域。该抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示;其制备方法为:通过合成的方法制备CDC42‑K153肽段DLKAVKYVECSALTQKGL,其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;并得到乙酰化修饰肽段,未加上乙酰化基团的作为对照肽段。将乙酰化修饰肽段免疫新西兰大白兔,产生定点乙酰化多克隆抗体,得到抗血清;该K153位点乙酰化的特异性抗体在测定CDC42的K153乙酰化表达水平的应用。本发明开发一种K153位点乙酰化的特异性抗体,应用于CDC42蛋白K153位点乙酰化抗原的测定,具有良好特异性和灵敏性。