本发明提供抗H3N2流感病毒核蛋白单克隆抗体ZJU‑NP‑A3及其在检测中的应用。一种抗H3N2流感病毒核蛋白单克隆抗体,能识别H3N2流感病毒。该单克隆抗体亚型为IgG2a、κ型,命名为ZJU‑NP‑A3,能特异性识别流感病毒的核蛋白。抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID No.2,轻链氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。对该单克隆抗体进行进一步的理化性状分析和鉴定,并建立了该单克隆抗体通过免疫荧光实验检测流感病毒核蛋白的方法。本发明为临床H3N2流感病毒感染的辅助诊断提供了有效工具,并可推广应用于多种检测技术以及临床和实验研究。