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[发明专利]全自动磁控多重巢式PCR检测试管-CN202210469558.9在审
发明人：邵光业;谢波;郭登五;娄域峰;林平;尹居鑫;其他发明人请求不公开姓名 -专利权人：杭州天微基因科技有限公司
申请日： 2022-04-30 - 公布日： 2022-08-16 - 主分类号： C12M1/24 文献下载
摘要：本发明公开了全自动磁控多重巢式PCR检测试管，包括：裂解液腔、隔离腔、清洗腔、第一轮扩增腔、第二轮扩增腔、柱塞；通过纳米磁珠对核酸进行提取，外部磁体依次将纳米磁珠穿过裂解液腔、隔离腔和清洗腔，最终移动到第一轮扩增腔扩增；所述柱塞为磁性材料可在外部磁场作用下移动从而将第一扩增产物注射到第二轮扩增腔；第二轮扩增腔内的反应液在外部温控装置的作用下与第一轮扩增产物混匀并进行第二轮核酸扩增，通过外部光学检测装置实时检测核酸扩增过程，从而实现巢式PCR在同一试管内实现核酸的提取、清洗、洗脱、第一轮扩增、第二轮扩增检测多个步骤。本发明可以减少巢式PCR的操作难度，解决巢式PCR易污染的问题，提高了检测的准确性和检测效率。
全自动多重 pcr 检测试管

[实用新型]全自动磁控多重巢式PCR检测试管-CN202221026212.3有效
发明人：邵光业;谢波;郭登五;娄域峰;请求不公布姓名;林平 -专利权人：杭州天微基因科技有限公司
申请日： 2022-04-30 - 公布日： 2023-02-17 - 主分类号： C12M1/24 文献下载
摘要：本发明公开了全自动磁控多重巢式PCR检测试管，包括：裂解液腔、隔离腔、清洗腔、第一轮扩增腔、第二轮扩增腔、柱塞；通过纳米磁珠对核酸进行提取，外部磁体依次将纳米磁珠穿过裂解液腔、隔离腔和清洗腔，最终移动到第一轮扩增腔扩增；所述柱塞为磁性材料可在外部磁场作用下移动从而将第一扩增产物注射到第二轮扩增腔；第二轮扩增腔内的反应液在外部温控装置的作用下与第一轮扩增产物混匀并进行第二轮核酸扩增，通过外部光学检测装置实时检测核酸扩增过程，从而实现巢式PCR在同一试管内实现核酸的提取、清洗、洗脱、第一轮扩增、第二轮扩增检测多个步骤。本发明可以减少巢式PCR的操作难度，解决巢式PCR易污染的问题，提高了检测的准确性和检测效率。
全自动多重 pcr 检测试管

[发明专利]一种连续流动巢式PCR微流控方法-CN201210066670.4无效
发明人：章春笋;邢达;舒博文 -专利权人：华南师范大学
申请日： 2012-03-14 - 公布日： 2012-07-25 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种连续流动巢式PCR微流控方法，该方法针对目标检测物的DNA序列设计由两对引物构成的巢式引物，将待测样品DNA加入含外引物的PCR反应体系混匀后注入连续流动式巢式PCR微流控装置中，使PCR反应液沿螺旋缠绕在三个独立控温的恒温铜柱片上的毛细管完成20~35个PCR扩增循环，并由毛细管末端的荧光检测与分析系统对扩增产物进行荧光图像采集与分析。将扩增产物加入包含内引物的PCR反应体系中，如上所述完成巢式PCR第二步扩增与产物检测。通过对两轮扩增产物荧光图像强度的分析，可确定待测样品中目标检测物的存在与否及其相对量。
一种连续流动 pcr 微流控方法

[发明专利]豇豆单胞锈菌的巢式PCR检测引物及检测方法-CN202010100390.5有效
发明人：殷丽华;柯希望;徐晓丹;左豫虎;郭博铖;麻晓萱 -专利权人：黑龙江八一农垦大学
申请日： 2020-02-18 - 公布日： 2022-11-25 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明涉及的是豇豆单胞锈菌的巢式PCR检测引物及检测方法，其中豇豆单胞锈菌的巢式PCR检测引物采用豇豆单胞锈菌（Uromyces vignae）特异性检测引物对基因组DNA进行扩增，并对扩增产物进行测序获得UV‑ITS扩增产物序列信息，以此序列信息为模板设计巢式PCR引物，并命名为UV‑MX，获得SEQID NO:1和SEQ ID NO:组成的豇豆单胞锈菌的巢式PCR检测引物。本发明操作简便、快速，对待测样品基因组DNA进行提取、PCR扩增和常规的琼脂糖电泳后即可判定结果，整个检测过程采用DNA快速提取方法，无需对病原菌进行分离培养，大大缩短了检测时间，一般整个检测过程可在6
豇豆锈菌 pcr 检测引物方法

[发明专利]一种检测污染水体中人粪的PCR试剂盒及其检测方法-CN201410407827.4有效
发明人：陈慧梅;何席伟;张徐祥;崔益斌;于红霞 -专利权人：南京大学
申请日： 2014-08-18 - 公布日： 2014-11-19 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测污染水体中人粪的PCR试剂盒及其检测方法，属于水体污染检测领域。一种检测污染水体中人粪的PCR试剂盒，包括4种巢式PCR引物、dNTP、PCR buffer、Mg2+和ddH2O，使用两轮PCR扩增，巢式PCR引物SHF1、SHR1的检测阈值为0.916pg/ul人粪DNA，巢式PCR引物NHF1、NHR1的检测阈值为0.057pg/ul人粪DNA，在第一轮PCR扩增后未检测出污染时，可以进行第二轮PCR扩增。通过PCR手段检测水体人线粒体DNA来判断粪便污染，具有良好的特异性，降低了对检测样本的误判，可以实现快速、准确地检测水体中的微量人粪污染。
一种检测污染水体中人 pcr 试剂盒及其方法

[发明专利]一种检测污染水体中猪粪的PCR试剂盒及其检测方法-CN201410407997.2有效
发明人：陈慧梅;何席伟;张徐祥;崔益斌;于红霞 -专利权人：南京大学
申请日： 2014-08-18 - 公布日： 2014-11-19 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测污染水体中猪粪的PCR试剂盒及其检测方法，属于水体污染检测领域。一种检测污染水体中猪粪的PCR试剂盒，包括4种巢式PCR引物、dNTP、PCR buffer、Mg2+溶液和ddH2O，使用两轮PCR扩增，巢式PCR引物SPF1、SPR1的检测阈值为0.254ng/ul猪粪DNA，巢式PCR引物NPF1、NPR1的检测阈值为0.008ng/ul猪粪DNA，在第一轮PCR扩增后未检测出污染时，可以进行第二轮PCR扩增。通过PCR手段检测水体猪线粒体DNA来判断粪便污染，具有良好的特异性，降低了对检测样本的误判，可以实现快速、准确地检测水体中的微量猪粪污染。
一种检测污染水体中猪粪 pcr 试剂盒及其方法

[发明专利]一种检测肿瘤组织中EGFRvIII的方法-CN201510745581.6在审
发明人：李军旗;袁晓辉;王茜婷;何有文;廖化新;张建 -专利权人：暨南大学;广州泰诺迪生物科技有限公司;广东三九脑科医院
申请日： 2015-11-03 - 公布日： 2016-02-03 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测肿瘤组织中EGFRvIII的方法，该方法是把需检测目的基因序列，先利用编写的序列分析程序进行序列扫描，引物筛选，以设计得到巢式PCR引物，然后进行肿瘤组织RNA提取和cDNA获得，最后采用巢式PCR的方法进行连续两轮PCR扩增后再对扩增产物进行测序，通过序列分析对结果进行验证。本发明可以在短时间内灵敏检测出恶性肿瘤组织中EGFRvIII的存在，为靶向治疗提供良好前提和基础；采用巢式PCR方法，通过两轮PCR扩增放大基因表达信号，使观察结果更简单，进一步提高方法适用性；扩增产物具有特异性，确保PCR检测高准确度和灵敏度。
一种检测肿瘤组织 egfrviii 方法

[发明专利]一种利用双重巢式RT-PCR检测GRSPaV的方法-CN202110031299.7有效
发明人：胡国君;董雅凤;张尊平;范旭东;任芳 -专利权人：中国农业科学院果树研究所
申请日： 2021-01-11 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用双重巢式RT‑PCR检测GRSPaV的方法，属于分子生物学技术领域。本发明公开的一种利用双重巢式RT‑PCR检测GRSPaV的方法，包括两轮PCR扩增；本发明方法可在一种病毒的两个基因上同时进行巢式扩增，其检出率与两个片段单一巢式PCR的检出率总和相同；本发明方法可有效降低检测成本
一种利用双重 rt pcr 检测 grspav 方法

[发明专利]用于检测鸭丙型肝炎病毒的巢式PCR扩增引物及其应用-CN202210950658.3在审
发明人：张雪莲;姚鑫炎;邵建伟;黄淑坚;吕志航;张玉倩 -专利权人：佛山科学技术学院
申请日： 2022-08-09 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于检测鸭丙型肝炎病毒的巢式PCR扩增引物及其应用，涉及病毒检测技术领域。一种用于检测鸭丙型肝炎病毒的巢式PCR扩增引物，包括以下引物：DHCV‑F1：ACTCTCCACCTCAACGAAGT(SEQ ID NO:1)；DHCV‑F2：TGCTGTCGGTGCGTCAAT(SEQID采用该巢式PCR扩增引物检测鸭丙型肝炎病毒，具有很高的敏感性和很强的特异性，大大降低了检测成本和检测时间，可用于临床样本的检测及大规模的流行病学调查。
用于检测鸭丙型肝炎病毒 pcr 扩增引物及其应用

[发明专利]Ⅰ群禽腺病毒巢式PCR的特异性引物及其检测方法与应用-CN202011506249.1在审
发明人：杨晶晶;金红岩;王俊书 -专利权人：西藏职业技术学院
申请日： 2020-12-18 - 公布日： 2021-02-26 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种Ⅰ群禽腺病毒巢式PCR的特异性引物，该特异性引物包括用于第一轮PCR扩增的外引物对和用于第二轮PCR扩增的内引物对，所述外引物对包括外引物F1和外引物R1，所述内引物对包括内引物F2和内引物R2，还提供了巢式PCR检测方法，提取疑似感染Ⅰ群禽腺病毒的禽类的基因组DNA，得到待检测基因组DNA；建立Ⅰ群禽腺病毒巢式PCR体系，先用内引物对S1中得到的待检测基因组DNA进行第一轮PCR扩增，得到第一轮PCR扩增产物，再用所述第一轮PCR扩增的扩增产物进行第二轮PCR扩增，得到感染Ⅰ群禽腺病毒的基因特异性核酸片段。
群禽腺病毒 pcr 特异性引物及其检测方法应用

[发明专利]一种基于酶切的巢式PCR方法-CN201910296963.3有效
发明人：曹文刚;王珍珍 -专利权人：湖北擎科生物科技有限公司
申请日： 2019-04-15 - 公布日： 2022-12-16 - 主分类号： C12Q1/6848 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于酶切的巢式PCR方法，属于基因工程技术领域，解决了大批量PCR扩增不稳定及DNA的非特异性问题。方法包括以下步骤：S1、将第一轮PCR引物的两端加上限制性内切酶酶切位点序列，进行第一轮PCR扩增；S2、将扩增后片段连入克隆载体中，提取质粒挑选正确的克隆；S3、使用相应的限制性内切酶酶切重组载体，切下的片段进行琼脂糖凝胶电泳纯化；S4、使用第二轮PCR引物对步骤S3纯化后片段进行第二轮PCR的扩增。本发明提供的基于酶切的巢式PCR方法，整个流程使用两对引物，得到的模板进行二轮扩增时特异性远高于常规的巢式PCR，且使用这个模板进行大批量的PCR扩增时十分稳定，也不会产生非特异性扩增。
一种基于 pcr 方法

[发明专利]一种通用型猪流行性腹泻病毒巢式PCR检测方法-CN201910170144.4在审
发明人：刘国平;晋钱钱;常小云;刘梦杰;胡利群;张兴明 -专利权人：长江大学
申请日： 2019-03-07 - 公布日： 2019-05-10 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种通用型猪流行性腹泻病毒巢氏PCR检测方法，其特征在于：通过编码猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白N中碱基序列得到两对巢式引物，分别为外侧引物PEDV‑O‑F、PEDV‑O‑R和内侧引物PEDV‑I‑F用两对引物进行两次PCR扩增，第一次PCR扩增使用反转录酶得到cDNA并进行扩增，第二次使用第一次PCR扩增产物进行扩增，每次PCR扩增产物分别进行1％琼脂糖凝胶电泳以检测猪流行性腹泻病毒。本发明提供的巢式PCR检测方法特异性强、灵敏度高、抗干扰性能好，且可靠性强，克服了普通PCR检测灵敏度低，特异性差等问题，而且与现有的核酸杂交、基因芯片等检测方法相比成本较低，检测周期短，实用性强。
猪流行性腹泻病毒检测巢式PCR 灵敏度通用型扩增琼脂糖凝胶电泳核衣壳蛋白N 抗干扰性能巢式引物反转录酶核酸杂交基因芯片碱基序列两对引物内侧引物特异性强外侧引物

[发明专利]一种巢式PCR数字定量方法-CN201410396994.3有效
发明人：谢兵 -专利权人：北京恩济和生物科技有限公司
申请日： 2014-08-13 - 公布日： 2014-12-10 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供了一种巢式数字PCR定量方法，其特征是改进的巢式PCR及样本10倍稀释梯度分散至有限单元的数字PCR方法，包括下列步骤：在每个反应单元中预先加入矿物油,在矿物油下方加入1-5μL小体积的第一轮PCR混合液，所述混合液包括等体积的2×反应液和连续10倍稀释梯度的样本液，在第一退火温度下使用外侧引物进行第一轮扩增；随后在第一轮扩增产物中加入10-20倍于第一轮PCR体积的第二轮PCR反应液，在第二退火温度下使用内侧引物进行第二轮扩增；最后检测扩增产物，进行计数定量。本发明还提供了用于本发明的巢式数字PCR定量方法的基因检测试剂盒。
一种 pcr 数字定量方法

[发明专利]快速检测柑橘全爪螨拟除虫菊酯抗性的分子标记方法-CN201510038036.3在审
发明人：王进军;蒋玄赵;丁天波;廖重宇 -专利权人：西南大学
申请日： 2015-01-26 - 公布日： 2015-07-01 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明一种快速检测柑橘全爪螨拟除虫菊酯抗性的分子标记方法，包括如下步骤1)制备PCR扩增模板以单头柑橘全爪螨为样品；2)进行巢式PCR扩增第一轮PCR以步骤1制备的样品作为扩增模板，使用引物A、B进行PCR扩增；第二轮PCR以第一轮PCR产物作为扩增模板，使用引物C、D进行PCR扩增；3)酶切取第二轮PCR产物用BclI酶进行酶切反应；4)电泳将步骤3中酶切后的反应液用1.5％的琼脂糖凝胶进行电泳，观察307bp本发明方法避免了DNA提取这一步骤，直接利用巢式PCR和酶切的方法快速检测单头柑橘全爪螨F1538I突变。
快速检测柑橘全爪螨拟除虫菊抗性分子标记方法

[发明专利]土壤中H9亚型禽流感病毒分子的检测方法-CN201210071924.1无效
发明人：李自力;毕丁仁;于洋;肖运才;王香萍;况世昌;刘梅;金卉 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2012-03-19 - 公布日： 2013-09-25 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：将同一地点不同位置所采的土壤混合，过20目分析筛，去除土壤中的石头及杂草；C、待检土壤样品中RNA的提取，使用土壤RNA提取试剂盒，提取土壤中的总RNA，D、病毒RNA的反转录，建立病毒RNA反转录体系；E、巢式PCR扩增目的基因：1）建立巢式PCR扩增反应体系；2）建立巢式PCR外侧引物扩增反应温度；3）建立巢式PCR内侧引物扩增反应温度：4）扩增产物分析。
土壤 h9 禽流感病毒分子检测方法