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[发明专利]一种培养小鼠胚胎干细胞的方法及其专用培养基-CN200610169528.7有效
发明人：周海胜;孙晓萌;邓宏魁;丁明孝 -专利权人：北京维通达生物技术有限公司
申请日： 2006-12-22 - 公布日： 2007-07-11 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种培养小鼠胚胎干细胞的方法及其专用培养基。该培养小鼠胚胎干细胞的方法，是在滋养层细胞上，用胚胎干细胞培养液培养小鼠胚胎干细胞，其中，所述滋养层细胞为上皮细胞或内皮细胞。该方法中所用的培养小鼠胚胎干细胞的培养基由上皮细胞或内皮细胞和胚胎干细胞培养液组成。该胚胎干细胞培养液优选是高糖DMEM，10－20％胎牛血清或小牛血清，1.5－3.0×10^－4mol/L硫代甘油(Monothioglycerol，MTG)。本发明的培养小鼠胚胎干细胞的方法，操作简便，培养成分简单，成本低廉，具有重要的应用价值和经济价值。
一种培养小鼠胚胎干细胞方法及其专用培养基

[发明专利]荧光染料标记小鼠胚胎干细胞的方法及其应用-CN201110440323.9有效
发明人：阮静;崔大祥 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2011-12-23 - 公布日： 2012-07-04 - 主分类号： C12N5/0735 文献下载
摘要：本发明公开一种荧光染料标记小鼠胚胎干细胞的方法及其应用，步骤：用0.1％明胶包被细胞培养皿并在室温下放置至少30分钟，将小鼠胚胎干细胞传代到包被后的培养皿中，并且用条件培养基进行培养，无滋养层培养至少3代；再将无滋养层培养的小鼠胚胎干细胞用无机荧光染料和有机荧光染料标记待用；最后将荧光染料标记的小鼠胚胎干细胞应用于体内识别肿瘤细胞。本发明用荧光染料标记小鼠胚胎干细胞，制备出具有良好的生物安全性、强的荧光强度、较持久的抗荧光淬灭性、以及较长的发射波长等特性的胚胎干细胞探针，可以用于识别体内肿瘤细胞，为临床上应用胚胎干细胞技术治疗肿瘤提出了创新点和科研方向
荧光染料标记小鼠胚胎干细胞方法及其应用

[发明专利]一种利用胚胎干细胞实验模型检测氢醌的胚胎毒性方法-CN201910830406.5在审
发明人：杨慧慧 -专利权人：杨慧慧
申请日： 2019-09-04 - 公布日： 2019-11-12 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用胚胎干细胞实验模型检测氢醌的胚胎毒性方法，本发明通过小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的制备、小鼠胚胎干细胞的培养和氢醌对小鼠胚胎干细胞的毒性作用三个步骤，通过计算IC₅₀3T3、ID₅₀和IC₅₀ES来判断氢醌对小鼠胚胎干细胞的毒性作用，本发明一种利用胚胎干细胞实验模型检测氢醌的胚胎毒性方法，可以有效的检测氢醌的胚胎毒性，本方法可以进一步推断氢醌为强胚胎毒性化合物
氢醌胚胎毒性小鼠胚胎干细胞胚胎干细胞实验模型检测毒性作用小鼠胚胎成纤维细胞社会经济效益安全性提供三个步骤饲养层制备推断研究

[发明专利]一种小鼠胚胎干细胞单细胞融合方法-CN201810552641.6在审
发明人：刘忠华;牟彦双;郭佳;方园;厉雪纯 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2018-05-31 - 公布日： 2018-10-26 - 主分类号： C12N15/06 文献下载
摘要：一种小鼠胚胎干细胞单细胞融合方法,属于细胞工程技术领域。针对细胞融合效率低的问题，本发明提供了一种小鼠胚胎干细胞单细胞融合方法，是以小鼠胚胎干细胞(mESC)作为细胞融合对象，用含质量分数0.25％胰酶的消化液将mESC消化成单细胞，利用细胞凝集素构建一对一的单细胞对，在含有50％聚乙二醇中培养1min，随后将细胞继续培养7天，获得小鼠胚胎干细胞融合细胞。
小鼠胚胎干细胞融合细胞工程技术细胞融合效率单克隆抗体细胞动物育种聚乙二醇融合细胞细胞凝集细胞融合质量分数消化液构建胰酶一对一消化生产研究

[发明专利]雌激素相关受体2在维持小鼠胚胎干细胞多能性中的应用-CN200810219195.3无效
发明人：裴端卿;张小飞;张娟;王涛 -专利权人：中国科学院广州生物医药与健康研究院
申请日： 2008-11-18 - 公布日： 2009-07-29 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明公开了用小鼠Esrrb(雌激素相关受体2)基因的载体构建方法及其在小鼠胚胎干细胞研究中的用途。小鼠缺失Esrrb会导致上胚层的干细胞分化并且胚胎发育出现不正常，胚胎会在发育的10.5天死亡，说明Esrrb对于维持哺乳动物的胚胎正常发育起着非常重要的作用。本发明中，Esrrb作为转录因子，可以不依赖于LIF(白细胞介素抑制因子)维持胚胎干细胞多能性的作用。该重组体的构建途径及在胚胎干细胞中的应用，对研究其它转录因子如何在胚胎干细胞中发挥作用提供了借鉴意义。
雌激素相关受体维持小鼠胚胎干细胞多能中的应用

[发明专利]一种白蛋白/角蛋白双表达小鼠胚胎干细胞系及其建立方法-CN200810202862.7有效
发明人：王欣;李阳芳 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院
申请日： 2008-11-18 - 公布日： 2010-06-30 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种白蛋白/角蛋白双表达小鼠胚胎干细胞系及其建立方法，本发明的小鼠胚胎干细胞系由白蛋白/角蛋白双表达的小鼠胚胎干细胞传代培养建立，所述小鼠胚胎干细胞整合有红色荧光/绿色荧光蛋白双报告基因，所述报告基因由组织特异性启动子白蛋白利用本发明的白蛋白/角蛋白双表达小鼠胚胎干细胞分化，可以明确地分选得到发育阶段均一的肝祖细胞，对接下来的肝祖细胞分化机制研究和细胞移植及治疗带来极大的有益效果。
一种白蛋白角蛋白表达小鼠胚胎细胞系及其建立方法

[发明专利]一种建立小鼠全基因组突变胚胎干细胞库的方法-CN03116852.3有效
发明人：顾华;黄芳;王铸钢 -专利权人：上海南方模式生物科技发展有限公司
申请日： 2003-05-12 - 公布日： 2004-11-24 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用基因捕获技术建立大规模的覆盖小鼠全基因组的突变小鼠胚胎干细胞库的建立方法。它包括步骤：(a)将基因捕获载体导入胚胎干细胞，所述基因捕获载体从5′至3′的结构是：LTR－RNA剪接的受体序列－启动子－筛选基因－RNA剪接的供体序列－LTR，其中筛选基因不含polyA区；(b)筛选存活的、带有筛选基因的胚胎干细胞；和(c)合并存活的胚胎干细胞，获得突变胚胎干细胞库。本发明方法为大规模、高通量获取基因突变小鼠奠定了基础。
一种建立小鼠基因组突变胚胎干细胞方法

[发明专利]一种用于小鼠胚胎干细胞的基因插入突变系统及其突变方法和应用-CN201810585654.3在审
发明人：崔宗斌;赵熠;宋桂丽;李青 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2018-06-06 - 公布日： 2018-10-30 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于小鼠胚胎干细胞的基因插入突变系统及其突变方法和应用。本发明构建了含有筛选标记基因的内源基因突变载体和可诱导突变载体进行基因组整合的转座酶表达载体，利用电转染方法，将两种载体共同导入小鼠胚胎干细胞中，再通过诱导转座酶表达、细胞抗性筛选、细胞克隆鉴定和整合位点分析，构建小鼠胚胎干细胞内源基因的有效突变方法，获得携带单一突变基因和具备全能分化能力的细胞克隆。本发明突变载体可随机插入小鼠胚胎干细胞的基因组中，干扰该内源基因的转录表达。本发明突变方法可对小鼠胚胎干细胞基因组进行大规模插入突变，获得携带单一突变基因和具备全能分化能力的细胞克隆库，用于小鼠突变体的研制和基因功能研究。
小鼠胚胎干细胞突变内源基因突变载体细胞克隆分化能力基因插入突变基因突变系统基因组构建基因功能研究筛选标记基因基因组整合转录表达载体插入突变细胞抗性诱导转座携带酶表达突变体转座酶电转位点小鼠整合应用诱导筛选分析

[发明专利]一种建立小鼠全基因组突变ES细胞库的方法-CN03142076.1无效
发明人：王铸钢;党素英;费俭 -专利权人：上海南方模式生物科技发展有限公司;上海第二医科大学附属瑞金医院;中国科学院上海生命科学研究院上海第二医科大学健康科学中心;上海第二医科大学
申请日： 2003-08-06 - 公布日： 2005-02-16 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用双向双选择基因捕获技术建立大规模的突变小鼠胚胎干细胞库的建立方法。它包括步骤：(a)将基因捕获载体导入胚胎干细胞，所述基因捕获载体从5′至3′的结构是：SA－ST－DS－S1－P1－P2－S2－pA－P3－S3－SD－Ap－TS－AS；(b)筛选带有筛选基因标记的胚胎干细胞；和(c)合并带有筛选基因标记的胚胎干细胞，获得突变胚胎干细胞库。本发明方法为大规模、高通量获取基因突变小鼠奠定了基础。
一种建立小鼠基因组突变 es 细胞方法

[发明专利]一种人工诱导多能干细胞分化为红细胞的方法-CN201710671983.5有效
发明人：张正亮 -专利权人：安徽惠恩生物科技股份有限公司
申请日： 2017-08-08 - 公布日： 2017-10-17 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明公开了一种人工诱导多能干细胞分化为红细胞的方法，该方法具体步骤如下：取胚胎干细胞接种在小鼠胚胎成纤维细胞培养层上；胚胎干细胞的常规培养；胚胎干细胞预诱导形成胚胎体；胚胎干细胞定向分化形成造血干细胞；将消化后的干细胞加入至脱核诱导培养基重悬细胞，接种于培养皿中，培养20d后得到定向分化的红细胞。本发明通过在胚胎干细胞向造血干细胞定向转化过程中加入干细胞因子(SCF)，采用分阶诱导的方式促使细胞分化，诱导使用的干细胞来源于胚胎干细胞，易于体外扩增，取材方便，提供了一种经济安全，行之有效的新的红细胞来源
一种人工诱导多能干细胞化为红细胞方法

[发明专利]小鼠胚胎肝基质细胞KM3作为人胚胎干细胞饲养层细胞的用途-CN201310718153.5无效
发明人：胡嘉波;张微;麻全慧;胡三强;徐虹 -专利权人：江苏大学
申请日： 2013-12-24 - 公布日： 2014-04-09 - 主分类号： C12N5/0735 文献下载
摘要：本发明涉及小鼠胚胎肝基质细胞KM3作为人胚胎干细胞饲养层细胞的用途。具体是KM3细胞经过10μg/ml的丝裂霉素C处理2h后，在液氮中冻存60d，复苏后细胞可作为人胚胎干细胞传代培养的饲养层细胞，支持人胚胎干细胞稳定传代。
小鼠胚胎基质细胞 km3 为人干细胞饲养用途

[发明专利]小鼠胚胎干细胞培养液及诱导培养两种不同类型的胚胎干细胞系和类囊胚的方法-CN202211681745.X在审
发明人：吴宝江;包斯琴;杨志青;李喜和 -专利权人：内蒙古大学
申请日： 2022-12-26 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N5/0735 文献下载
摘要：本发明公开了一种小鼠胚胎干细胞培养液、胚胎干细胞体外诱导培养方法、以及利用该培养液和培养方法，首次从3‑4天的小鼠囊胚建立两种不同类型胚胎干细胞系，进一步利用这两种类型的干细胞系，体外诱导获得类囊胚结构这种来源于同一个囊胚的两种细胞系聚合获得的类囊胚排除了不同个体细胞之间的免疫排斥反应，为人类干细胞的临床应用和药物筛选提供理论依据和技术支撑。该方法制备的小鼠两种不同类型的胚胎干细胞和类囊胚能用于基因编辑、动物克隆、医学模型和药物筛选研究等领域。
小鼠胚胎干细胞培养液诱导培养不同类型细胞系囊胚方法

[发明专利]一种小分子化合物的用途-CN201310191600.6无效
发明人：赵猛 -专利权人：赵猛
申请日： 2013-05-22 - 公布日： 2013-10-23 - 主分类号： C12N5/0735 文献下载
摘要：具体为小分子化合物CHIR99021用于促进胚胎干细胞的自我更新且抑制分化的用途和用于干细胞培养基成分的用途。还保护一种包括小分子化合物CHIR99021的干细胞培养基。单独使用该小分子CHIR99021能很好地维持小鼠胚胎干细胞的干性，并可以增加小鼠胚胎干细胞形成克隆的效率。
一种分子化合物用途

[发明专利]一种维持小鼠胚胎干细胞干性的培养方法-CN202210721200.0有效
发明人：叶守东;陈鹏;朱雨晴 -专利权人：安徽大学
申请日： 2022-06-10 - 公布日： 2023-07-11 - 主分类号： C12N5/0735 文献下载
摘要：本发明提供一种维持小鼠胚胎干细胞干性的培养方法，细胞能够在该条件下保持在一个全新的形态且能长期维持并传代培养。本发明使用了全新的培养条件，并且该方法可能适用于其它哺乳动物包括人的胚胎干细胞的培养。本发明通过建立全新的小鼠胚胎干细胞培养方法，能够更好的优化干细胞培养条件，揭示了小鼠胚胎干细胞多能性调控的新网络，深化了人们对于干细胞不同多能性状态的理解，为优化当前的干细胞培养条件以适应不同的多能性状态提供了新的见解
一种维持小鼠胚胎干细胞干性培养方法

[发明专利]一种孤雌单倍体胚胎干细胞及其制备与应用-CN201510765622.8有效
发明人：李劲松;钟翠青;谢振飞;尹奇 -专利权人：中国科学院分子细胞科学卓越创新中心
申请日： 2015-11-11 - 公布日： 2020-06-26 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种孤雌单倍体胚胎干细胞及其制备与应用。本发明提供了一种孤雌单倍体胚胎干细胞，所述孤雌单倍体胚胎干细胞的H19 DMR及IG‑DMR被敲除。本发明还进一步提供了所述孤雌单倍体胚胎干细胞的制备方法，以及所述孤雌单倍体胚胎干细胞在构建基因改造半克隆动物及基因改造半克隆动物文库中的用途。本发明的孤雌单倍体胚胎干细胞能够注射到卵子中能稳定地获得存活的SC小鼠，且能有效地用于多基因遗传操作，进一步得到携带多基因遗传修饰的动物。
一种单倍体胚胎干细胞及其制备应用

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