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[发明专利]一种游离型非甲醇诱导毕赤酵母表达载体的构建及其应用-CN201910476834.2在审
发明人：吴敬;胡梦凯;夏伟;吴丹 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-06-03 - 公布日： 2019-08-30 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明涉及一种游离型非甲醇诱导毕赤酵母表达载体的构建及其在酶重组表达中的应用，属于基因工程技术领域。本发明所述非甲醇诱导毕赤酵母表达载体是将乳酸克鲁维酵母自主复制序列PARS2和毕赤酵母启动子P_GCW14序列插入载体骨架，属于带自我复制序列的游离型载体构建得到的。利用该载体构建的游离型重组毕赤酵母工程菌相对通用的整合型重组毕赤酵母工程菌，分泌生产重组酶的能力显著提升。此外，其发酵原料来源广泛，生产成本较低。
毕赤酵母表达载体非甲醇游离型构建重组毕赤酵母诱导工程菌乳酸克鲁维酵母基因工程技术序列插入载体自主复制序列游离型载体发酵原料生产重组载体构建重组表达自我复制启动子通用的整合型分泌生产成本应用

[发明专利]灵芝漆酶毕赤酵母基因工程菌株的构建与应用-CN201510876149.0在审
发明人：周选围;徐慧;白晓慧;郭梦圆;高艳华 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2015-12-03 - 公布日： 2016-02-24 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：一种灵芝漆酶毕赤酵母基因工程菌株的构建与应用，通过从灵芝中克隆出漆酶基因GlLac，经EcoRI和XbaI双酶切后克隆入毕赤酵母表达质粒并构建出表达载体，最后将其电转化入毕赤酵母表达宿主菌中，经培养扩增和筛选后得到毕赤酵母工程菌本发明构建了灵芝漆酶(Lac)的酵母分泌型共表达载体pPICZαA-GlLac，并转化毕赤酵母(Pichia pastoris)X33，通过挑选高博莱霉素(Zeocin)抗性的重组子作为毕赤酵母工程菌。毕赤酵母的胞外表达载体pPICZαA是一个鉴定多拷贝基因插入到毕赤酵母基因组中的载体，能表达高拷贝的基因。
灵芝漆酶毕赤酵母基因工程菌株构建应用

[发明专利]一种蝎源抗菌肽IsCT在毕赤酵母中的表达方法及其在临床上治疗感染性外伤的应用-CN201410031070.3有效
发明人：潘韵;陈义昆;郑文官;侯雅君;唐明辉;李永新 -专利权人：深圳市圣西马生物技术有限公司
申请日： 2014-01-23 - 公布日： 2017-03-29 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一种蝎源抗菌肽IsCT在毕赤酵母中的表达方法及其在临床上治疗感染性外伤的应用，所述蝎源抗菌肽IsCT在毕赤酵母中的表达方法，步骤为含IsCT目的片段的获得；多拷贝IsCT衍生物重组质粒的构建；毕赤酵母分泌表达IsCT衍生物重组质粒的构建；重组毕赤酵母的构建和筛选；重组菌的摇瓶发酵诱导表达。本发明综合多项因素，采用巴斯德毕赤酵母表达系统，选用分泌型表达载体pPICZαA和Mut+型宿主菌X‑33，进行分泌表达蝎源抗菌肽IsCT衍生物，并对体外分泌表达产物进行抑菌活性检测，为其在临床上治疗外伤类感染类疾病提供理论基础及技术支持
一种抗菌 isct 酵母中的表达方法及其临床治疗感染性外伤应用

[发明专利]一种重组猪α-干扰素的制备方法-CN201110148880.3有效
发明人：刘美;赵宝凯;廖峰;马立新;余晓岚 -专利权人：北京伟嘉人生物技术有限公司;北京黑金刚农业有限公司
申请日： 2011-06-03 - 公布日： 2011-11-02 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组猪α-干扰素的制备方法，其是采用常规的PCR方法获得猪α-干扰素基因编码区，将其克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pHBM905A中，电转化毕赤酵母菌，筛选高抗性转化子，实现重组蛋白在毕赤酵母中的分泌表达本发明通过优化毕赤酵母表达系统，提高了重组蛋白的抗病毒活性。
一种重组干扰素制备方法

[发明专利]毕赤酵母定点DSB系统及应用-CN202011102551.0有效
发明人：周飒;马文建;李心雨;陈洪冉;晋利君;向婉晨 -专利权人：天津科技大学;齐鲁理工学院
申请日： 2020-10-15 - 公布日： 2023-01-20 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明涉及一种毕赤酵母定点DSB系统，构建步骤如下：构建site‑I‑SceI‑KanMX转化盒，利用诱导型启动子，电转化野生毕赤酵母GS115菌株，即得毕赤酵母定点DSB系统。本发明以毕赤酵母为载体，利用归位内切酶I‑SceI建立的定点DSB诱导系统，可以提高转化效率，同时细胞对其修复应答产生了Aneuploidy，与人肿瘤细胞中的Aneuploidy相似，可以作为一个研究定点
酵母定点 dsb 系统应用

[发明专利]一种提高毕赤酵母分泌型外源蛋白表达量的方法-CN201410395574.3有效
发明人：徐晓东;王华明;李冬冬;王海 -专利权人：青岛蔚蓝生物集团有限公司
申请日： 2014-08-13 - 公布日： 2017-04-05 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明的目的在于提供一种能提高毕赤酵母分泌型外源蛋白表达量的方法。通过将HAC1、ERO1双基因或HAC1、ERO1、BIP三基因在毕赤酵母胞内共表达，有效提高毕赤酵母分泌型外源蛋白的表达量。本发明将HAC1、ERO1双基因或HAC1、ERO1、BIP三基因转化入分泌表达外源木聚糖酶的巴斯德毕赤酵母中获得重组毕赤酵母菌株，进而显著提高了外源木聚糖酶的表达量。当毕赤酵母胞内共表达HAC1、ERO1双基因时，外源木聚糖酶的分泌表达量比初始水平普遍提高了15％‑25％；而当共表达HAC1、ERO1、BIP三基因时，木聚糖酶的分泌表达量比初始水平提高了45％‑57
一种提高酵母分泌型外源蛋白表达方法

[发明专利]基于电化学装置的重组毕赤酵母利用甲酸或CO2-CN202211697744.4在审
发明人：陈可泉;杨雯晶;冯娇;封荣辰;郭元柯;王昕 -专利权人：南京工业大学
申请日： 2022-12-28 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12N1/16 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于电化学装置的重组毕赤酵母利用甲酸或CO2生长的方法。该方法以甲酸或CO2为碳源，用微生物电化学系统提供外部电能实现重组毕赤酵母利用电能生长的应用。本发明选取天然的甲基营养型菌株巴斯德毕赤酵母为研究对象，前期构建了过表达还原性甘氨酸途径高效固碳的毕赤酵母，将重组毕赤酵母应用于微生物电化学系统中，以甲酸或CO2作为碳源，以微生物电化学系统供应的电能为能量来源，探究电能对毕赤酵母生长代谢的作用情况。
基于电化学装置重组酵母利用甲酸 co base sub

[发明专利]毕赤酵母基因敲除和抗性基因回收载体及构建方法与运用-CN201711340835.1有效
发明人：闫云君;焦梁成;周清华;宿智新;乔阳歌;杨凯欣 -专利权人：华中科技大学
申请日： 2017-12-14 - 公布日： 2020-09-08 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了毕赤酵母基因敲除和抗性基因回收载体及构建方法与运用，属于微生物基因工程领域。本发明毕赤酵母基因敲除的模板载体包括毕赤酵母甲醇型启动子AOX1调控的mazf基因表达盒以及两端的lox71和lox66特异性重组酶识别位点和博来霉素抗性基因表达盒；本发明毕赤酵母基因抗性基因回收载体包括利用毕赤酵母甲醇型启动子本发明极大地提高了毕赤酵母基因的敲除效率。本发明提供了基因敲除后抗生素标记回收的方法，为多基因的高效敲除提供了极大的便利，且敲除的效率高，使用的同源臂短。
酵母基因抗性回收载体构建方法运用

[发明专利]一种重组水貂α-干扰素的制备方法和应用-CN201510095208.0在审
发明人：张海玲;闫喜军;赵建军;张蕾;白雪;胡博;刘昊 -专利权人：中国农业科学院特产研究所
申请日： 2015-03-03 - 公布日： 2015-09-09 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：所述的制备方法采用常规的PCR方法获得α-干扰素基因编码区，将其克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pGAPZα中，电转化毕赤酵母菌，筛选高抗性转化子，实现重组蛋白在毕赤酵母中的分泌表达，并得到具有抗病毒活性的重组蛋白本发明通过优化毕赤酵母表达系统，提高了重组蛋白的抗病毒活性。
一种重组水貂干扰素制备方法应用

[发明专利]一种强化MutS-CN201811202974.2有效
发明人：丁健;史仲平;李程程;贾禄强;严建 -专利权人：江南大学
申请日： 2018-10-16 - 公布日： 2020-12-29 - 主分类号： C12N1/38 文献下载
摘要：本发明公开了一种强化MutS型毕赤酵母表达异源蛋白的方法，属于发酵工程技术领域。本发明的方法为以不同的周期长度将MutS型毕赤酵母甲醇诱导过程中的甲醇浓度和溶解氧浓度(DO)在“高/低水平”和“低/高水平”来回切换，以提高MutS型毕赤酵母的代谢活性和甲醇比消耗速度，降低胞内甲醇的积累，大幅提高异源蛋白的浓度和活性；利用本发明的方法，可使得MutS型毕赤酵母表达异源蛋白的水平较传统高甲醇浓度
一种强化 mut base sup

[发明专利]毕赤酵母制备人白细胞介素29成熟肽的方法-CN201110413183.6无效
发明人：陈伟;郑海军;于明磊;郁心;邬敏辰;吴静 -专利权人：江南大学
申请日： 2011-12-13 - 公布日： 2012-07-04 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明提供了一种人白细胞介素29(hIL-29)成熟肽的制备方法及表达hIL-29成熟肽的毕赤酵母工程菌。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工合成引物；2)从健康人外周血单个核细胞经反转录PCR得到hIL-29成熟肽的编码基因；3)构建含有hIL-29成熟肽编码基因的重组真核表达载体，融合于毕赤酵母表达调控元件获得重组毕赤酵母工程菌；4)培养重组毕赤酵母工程菌，于培养液添加甲醇诱导毕赤酵母工程菌表达hIL-29成熟肽；5)采用离子交换层析和分子筛层析从培养液上清纯化hIL-29成熟肽。本发明构建的重组毕赤酵母工程菌可进行高密度培养并且分泌型表达天然型hIL-29成熟肽，适用于工业化制备人白细胞介素29。
酵母制备白细胞 29 成熟方法

[发明专利]一种新型磷脂酶D及其制备磷脂酸、磷脂酰丝氨酸的方法-CN201610402557.7有效
发明人：刘逸寒;路福平;刘浩 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2016-06-02 - 公布日： 2019-07-19 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：其技术方案是利用重组DNA技术对野生型磷脂酶D基因进行定点突变，得到活力较高的磷脂酶D基因，然后将高活力磷脂酶D基因在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统(包括毕赤酵母游离表达系统和毕赤酵母细胞表面展示系统)中表达，得到产高活力磷脂酶D的重组菌株，表达后，检测高活力磷脂酶D的比酶活较野生型磷脂酶D提高38‑140％，高活力磷脂酶D在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统、毕赤酵母表面展示系统内发酵酶活最高值分别为
一种新型磷脂酶及其制备磷脂酸磷脂丝氨酸方法

[发明专利]一种磷脂酶D突变体及其应用-CN201910528114.6有效
发明人：刘逸寒;路福平 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2016-06-02 - 公布日： 2021-08-03 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：其技术方案是利用重组DNA技术对野生型磷脂酶D基因进行定点突变，得到活力较高的磷脂酶D基因，然后将高活力磷脂酶D基因在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统(包括毕赤酵母游离表达系统和毕赤酵母细胞表面展示系统)中表达，得到产高活力磷脂酶D的重组菌株，表达后，检测高活力磷脂酶D的比酶活较野生型磷脂酶D提高38‑140％，高活力磷脂酶D在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统、毕赤酵母表面展示系统内发酵酶活最高值分别为
一种磷脂酶突变体及其应用

[发明专利]磷脂酶D及其应用-CN201910528115.0有效
发明人：刘逸寒;路福平 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2016-06-02 - 公布日： 2021-08-03 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：其技术方案是利用重组DNA技术对野生型磷脂酶D基因进行定点突变，得到活力较高的磷脂酶D基因，然后将高活力磷脂酶D基因在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统(包括毕赤酵母游离表达系统和毕赤酵母细胞表面展示系统)中表达，得到产高活力磷脂酶D的重组菌株，表达后，检测高活力磷脂酶D的比酶活较野生型磷脂酶D提高38‑140％，高活力磷脂酶D在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统、毕赤酵母表面展示系统内发酵酶活最高值分别为
磷脂酶及其应用

[发明专利]一种磷脂酶D-CN201910528141.3有效
发明人：刘逸寒;路福平 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2016-06-02 - 公布日： 2021-08-03 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：其技术方案是利用重组DNA技术对野生型磷脂酶D基因进行定点突变，得到活力较高的磷脂酶D基因，然后将高活力磷脂酶D基因在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统(包括毕赤酵母游离表达系统和毕赤酵母细胞表面展示系统)中表达，得到产高活力磷脂酶D的重组菌株，表达后，检测高活力磷脂酶D的比酶活较野生型磷脂酶D提高38‑140％，高活力磷脂酶D在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统、毕赤酵母表面展示系统内发酵酶活最高值分别为
一种磷脂酶

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