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[发明专利]一种嗜热四膜虫的高密度发酵方法-CN201410024085.7有效
发明人：缪炜;钟秋萍;周志刚;袁冬霞;李青 -专利权人：中国科学院水生生物研究所;中国农业科学院饲料研究所
申请日： 2014-01-20 - 公布日： 2014-04-30 - 主分类号： C12N1/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种嗜热四膜虫的高密度发酵方法。本发明提供了一种培养四膜虫的方法，包括如下步骤：将四膜虫接种至pH5-9的发酵培养基，使四膜虫的初始密度为3125-50000cells/ml，然后采用50-200rpm转速培养10-96小时。本发明解决了四膜虫高密度发酵中两个迫在眉睫的问题，即培养基贵的问题和没有发酵工艺的问题，与现有技术相比其优点在于：⑴大大节省了成本，适合大批量培养四膜虫，为工业化生产四膜虫奠定了坚实的基础；⑵本发明在国内首次建立了发酵罐培养四膜虫的发酵工艺，并实现了四膜虫的高密度发酵，为四膜虫高密度生产产物奠定了坚实的基础。
一种四膜虫高密度发酵方法

[发明专利]采用嗜热四膜虫筛选抗鱼纤毛类寄生虫中草药成分的方法-CN202010035541.3在审
发明人：潘厚军;石存斌;常藕琴;张德锋;任燕;王亚军;谢骏;黄志斌 -专利权人：中国水产科学研究院珠江水产研究所
申请日： 2020-01-14 - 公布日： 2020-05-26 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种采用嗜热四膜虫筛选抗鱼纤毛类寄生虫中草药成分的方法，S1、对嗜热四膜虫进行培养；S2、对嗜热四膜虫生长曲线的测定；S3、中草药水煮液或中药单体试液的制备；S4、通过药物对嗜热四膜虫进行培养暴露；S5、药物暴露处理的嗜热四膜虫试液，进行细胞计数，分析药物抑制嗜热四膜虫生长的半数抑制浓度；S6、CCK‑8法测定细胞活力随药物浓度的变化，用SPSS软件计算CC50；S7、评估中草药对嗜热四膜虫的抑制杀灭效果；S8、设计药物浓度，添加入饲料中，评估鱼类对寄生虫的作用效果。采用可人工培养的嗜热四膜虫代替鱼纤毛类寄生虫，进行抗虫药物大通量筛选，受试材料随时可得，不受时间、温度、季节的限制，且具重复性好、经济适用快速。
采用四膜虫筛选纤毛寄生虫中草药成分方法

[发明专利]交联后的四膜虫小核的分离纯化方法-CN201510642078.8在审
发明人：宋晓元;罗正誉 -专利权人：中国科学技术大学
申请日： 2015-09-30 - 公布日： 2015-12-30 - 主分类号： C12N5/07 文献下载
摘要：本发明涉及一种交联后的四膜虫小核的分离纯化方法，具体是在用交联剂如甲醛对四膜虫细胞进行交联处理后，通过化学裂解法裂解细胞，最终通过离心分离四膜虫的小核。为嗜热四膜虫中的Hi-C及相关研究提供了可行性。
交联四膜虫分离纯化方法

[发明专利]四膜虫-CdS量子点胞内杂化体系、其构建方法及在可见光催化中的应用-CN202110249210.4在审
发明人：俞汉青;崔银花;张锋;吴景行 -专利权人：中国科学技术大学
申请日： 2021-03-08 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： B01J31/06 文献下载
摘要：本发明提供了一种四膜虫‑CdS量子点胞内杂化体系的构建方法，包括：将四膜虫与镉盐在营养培养基中孵育，得到四膜虫‑CdS量子点胞内杂化体系。与现有技术相比，本发明首次提供四膜虫内合成CdS量子点的方法，所合成的量子点具有高低pH、高离子强度、高温剂光催化稳定的特点，同时光催化稳定的特点使四膜虫‑CdS量子点胞内杂化体系非常适合应用于可见光催化反应
四膜虫 cds 量子点胞内杂化体系构建方法可见光催化中的应用

[发明专利]一种鉴定病原摇蚊四膜虫的荧光原位杂交寡核苷酸探针-CN202010678168.3在审
发明人：潘旭明;母伟杰;李文玉;陈瑛 -专利权人：哈尔滨师范大学
申请日： 2020-07-15 - 公布日： 2020-10-09 - 主分类号： C12Q1/6893 文献下载
摘要：本发明提供了一种病原摇蚊四膜虫的荧光原位杂交寡核苷酸探针，属于分子生物学领域，所述探针的序列为5’‑TGTAGTAGCCGTTTCTCAG‑3’，所述的探针5’端涉及有荧光标记基团。本发明还提供了所述探针制成的检测试剂盒，以及所述探针在制备摇蚊四膜虫检测试剂中的应用。本发明探针能够准确快速的鉴定出水产病害是否是摇蚊四膜虫，同时通过荧光染色能够研究摇蚊四膜虫的微观结构，为水产疾病的防治提供了技术支持。利用本发明探针能够明确摇蚊四膜虫在水产生物身体上的分布，针对发病程度，对症用药，阻断病害进一步扩散和传播。
一种鉴定病原四膜虫荧光原位杂交寡核苷酸探针

[发明专利]一种用四膜虫监测离子液体毒性的方法-CN202010744516.2在审
发明人：崔银花;谢小保;施庆珊;王玲玲 -专利权人：广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心）
申请日： 2020-07-29 - 公布日： 2020-11-27 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明属于离子液体毒性监测技术领域，提供了一种利用四膜虫监测离子液体毒性的方法。该方法是用离子液体处理四膜虫后通过染色法检测四膜虫的致死，判断离子液体的毒性大小。所述的染色法具体通过离子液体处理四膜虫后检测碘化丙啶与绿菁染色(PI/SYTO)的比例实现。PI/SYTO比例越大表示离子液体毒性越大。本发明所述方法带有灵敏度高，操作简单，便宜且检测时程短等特点。另一方面，通过检测对四膜虫毒性的方式，可进一步了解离子液体对水质的影响。综上，由于本发明的准确性和容易实现特性，本发明具有广阔的应用前景。
一种四膜虫监测离子液体毒性方法

[发明专利]一种促进四膜虫合成纳米硒的方法-CN202310117521.4在审
发明人：崔银花;施庆珊;谢小保;冯劲 -专利权人：广东省科学院微生物研究所（广东省微生物分析检测中心）
申请日： 2023-02-15 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12P3/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种促进四膜虫合成纳米硒的方法。它是用紫外光照射四膜虫培养体系，培养体系中含有硒盐。用紫外光照射四膜虫培养体系，其合成纳米硒的产量可达对照组的2倍。
一种促进四膜虫合成纳米方法

[发明专利]一种基于嗜热四膜虫tubulin蛋白的刺激隐核虫疫苗的制备方法-CN202210249011.8在审
发明人：李言伟;但学明;莫泽权;吴辉城;胡颖彤 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2022-03-09 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： A61K39/002 文献下载
摘要：本发明旨在解决激隐核虫疫苗制备成本较高且免疫保护效果不佳的技术问题，提供了一种基于嗜热四膜虫tubulin蛋白的刺激隐核虫疫苗的制备方法，首次鉴定出四膜虫中的交叉保护性抗原tubulin蛋白，并在大肠杆菌中对tubulin基因进行重组表达，以其作为抗原制备疫苗，大大提高了石斑鱼抗刺激隐核虫感染的能力。其免疫保护效果远高于利用四膜虫全虫蛋白或纤毛蛋白制备的异源疫苗。
一种基于四膜虫 tubulin 蛋白刺激隐核虫疫苗制备方法

[发明专利]用于梨形四膜虫的培养、保存的液体培养基和方法-CN200710175836.5无效
发明人：杨敏;刘娟 -专利权人：中国科学院生态环境研究中心
申请日： 2007-10-12 - 公布日： 2009-04-15 - 主分类号： C12N1/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于梨形四膜虫的培养的液体培养基，其为将10.0～15.0g眎蛋白胨、1.0～3.0g葡萄糖和2.0～5.0g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节pH为7.0～7.5而得。本发明将纯种梨形四膜虫以1.0～2.0％接种于该液体培养基中，补充10.0～20.0mg/L链霉素，保证给氧空间，25～30℃下恒温静置培养，可以简便、快捷地获得大量纯种四膜虫。本发明还涉及一种用于梨形四膜虫的长期保存的液体培养基，其为将4.0～6.0g眎蛋白胨、40.0～60.0g葡萄糖和3.0～5.0g酵母浸粉溶于1000ml无菌蒸馏水中，并调节pH值为7.0～7.5。本发明将纯种梨形四膜虫以5.0～20.0％接种于该液体培养基中，保证给氧空间，15～25℃下恒温静置保存，可将梨形四膜虫保存0.5～1.0年，有效地解决了其在非冻融状态下长期保存而不受污染的问题。
用于四膜虫培养保存液体培养基方法

[发明专利]含HSP70启动子和GFP的四膜虫转基因载体及制备方法和应用-CN200910062093.X有效
发明人：冯立芳;缪炜 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2009-05-15 - 公布日： 2009-11-25 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种含HSP70启动子和GFP的四膜虫转基因载体及制备方法和应用。利用质粒rDNA-GFP，通过酶切和PCR酶切位点突变等方法，构建质粒T-GFP；利用嗜热四膜虫基因组DNA，通过PCR扩增和克隆等方法，构建质粒T-HSP702；利用质粒T-GFP、T-HSP702和该载体含有HSP702启动子，能实现外源基因高效表达；该载体上含有可替换的外源基因gfp，通过替换不同的外源基因，以实现四膜虫成为一个外源基因表达系统；在巴龙霉素药物筛选作用下，该载体替换掉四膜虫体内原有的绝大部分rDNA，使外源基因在四膜虫体内大量倍增，以实现目标基因的遗传转化。本发明方法易行，操作方便，该载体在转染进四膜虫中可用于环境中三丁基锡的检测。
hsp70 启动子 gfp 四膜虫转基因载体制备方法应用

[发明专利]表达鸭源禽流感病毒NS1蛋白的方法以及该方法的应用-CN201810118970.X有效
发明人：朱春华;刘晓东;龚晖;池洪树;陈翠腾;陈珍;刘斌琼;黄瑜 -专利权人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所;福建省农业科学院生物技术研究所
申请日： 2018-02-06 - 公布日： 2021-02-23 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及一种表达鸭源禽流感病毒NS1蛋白的方法以及该方法的应用，该方法主要包括以下步骤：(1)四膜虫表达载体pD5H8‑NS1的构建；(2)四膜虫重组细胞株的构建及筛选；(3)NS1蛋白诱导表达及鉴定；所述的鸭源禽流感病毒NS1蛋白表达方法的应用，用于禽流感病毒鉴别诊断试剂盒的制备以及疫苗的制备中，本发明选用四膜虫表达系统作为鸭源禽流感病毒NS1蛋白的表达系统，能够高效、稳定的表达鸭源禽流感病毒NS1蛋白，本发明选用的四膜虫细胞表达系统所用的转基因表达载体pD5H8含高效金属硫蛋白基因MTT5启动子，为外源基因在四膜虫体内高效表达提供重要保证。
表达禽流感病毒 ns1 蛋白方法以及应用

[发明专利]一种基于四膜虫的生物治理蓝藻水华方法-CN202211297924.3在审
发明人：陈伟;高磊;王奉景;张铎;侯鑫彬;吴天月;赵佳琪;周琪 -专利权人：青岛农业大学
申请日： 2022-10-21 - 公布日： 2023-01-03 - 主分类号： C02F3/32 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于四膜虫的生物治理蓝藻水华方法，属于水环境污染治理及控制领域。本发明首次发现四膜虫(Tetrahymena sp.)能够高效吞噬微囊藻以防治蓝藻水华大规模爆发，同时其环境耐受性好，生长发育不受制于藻毒素等次生代谢产物影响。本发明通过分离得到能吞噬微囊藻的四膜虫，其作为模式生物易驯化培养，生存繁殖能力强，培养成本低，短时间内可以获得大量个体；利用四膜虫吞噬水华藻治理蓝藻水华，其可在较短时间内大量吞噬水华藻，除藻效率高，可达
一种基于四膜虫生物治理蓝藻方法

[发明专利]一种评价增溶性辅料生物安全性的方法-CN200910237161.1无效
发明人：鄢丹;张少锋;肖小河;杨明 -专利权人：中国人民解放军第三〇二医院
申请日： 2009-11-09 - 公布日： 2010-06-02 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：该方法以嗜热四膜虫为模型，结合微量量热法，考察增溶性辅料对嗜热四膜虫生长代谢的影响，评价增溶性辅料的生物安全性。本发明方法通过对具有整体性特征的热活性谱进行信息分析，采用反映不同生长代谢阶段的特征参数，全面、客观量化考察了增溶性辅料对嗜热四膜虫生长代谢的影响，评价了增溶性辅料的生物安全性，操作简单，有利于检测的规范化
一种评价增溶性辅料生物安全性方法

[发明专利]一种煤化工废水的生物毒性检测方法-CN201810154432.6在审
发明人：韩洪军;郑梦启;徐春艳;张正文 -专利权人：哈尔滨工业大学
申请日： 2018-02-22 - 公布日： 2018-07-27 - 主分类号： G01N21/31 文献下载
摘要：所述生物毒性检测方法采用四膜虫作为毒性测试物种。由于四膜虫普遍存在于煤化工废水中，四膜虫对生物毒性物质具有一定的适应性，敏感度不会过高。另一方面，与绿藻、大型溞或斑马鱼相比，四膜虫具有易于培养和繁殖周期短的优点。
生物毒性检测煤化工废水绿藻斑马鱼水质毒性测试繁殖周期生物毒性敏感度检测物种

[发明专利]一种用于快速固定嗜热四膜虫细胞计数的试剂及其计数方法-CN201911291709.0在审
发明人：潘厚军;常藕琴;石存斌;付小哲;王英英 -专利权人：中国水产科学研究院珠江水产研究所
申请日： 2019-12-16 - 公布日： 2020-05-01 - 主分类号： C12Q1/06 文献下载
摘要：本发明为一种用于快速固定嗜热四膜虫细胞计数的试剂，所述试剂为乙醇的水溶液。本发明的有益效果在于，固定嗜热四膜虫细胞时间迅速，5min即可完全固定，特别是试剂无色，对仪器无污染。
一种用于快速固定四膜虫细胞计数试剂及其方法

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