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[发明专利]一种斜带石斑鱼的养殖方法-CN202211118138.2有效
发明人：李言伟;但学明;李雄;曾诗敏;赖学礼 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2022-09-07 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： A01K61/10 文献下载
摘要：本发明旨在解决斜带石斑鱼养殖过程中感染刺激隐核虫后死亡率高的问题，在石斑鱼养殖过程中，为其注射一种免疫保护效果较好的重组蛋白疫苗，大大提高了斜带石斑鱼的抗病成活率。本发明也旨在解决刺激隐核虫疫苗制备成本较高且免疫保护效果不佳的技术问题，提供了一种基于刺激隐核虫膜蛋白CiIA1的亚单位疫苗制备方法，首次筛选鉴定出刺激隐核虫的CiIA1膜蛋白，并对其进行优化重组表达，以其作为抗原制备疫苗，大大提高了石斑鱼的抗刺激隐核虫感染的能力。
一种石斑鱼养殖方法

[发明专利]一种提高斜带石斑鱼成活率的养殖方法-CN202211118139.7在审
发明人：李言伟;但学明;李雄;吴辉城;洪宇豪 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2022-09-07 - 公布日： 2023-10-17 - 主分类号： A61K39/002 文献下载
摘要：本发明旨在解决斜带石斑鱼养殖过程中感染刺激隐核虫后死亡率高的问题，提供一种提高斜带石斑鱼成活率的养殖方法，在石斑鱼养殖过程中，为其注射一种免疫保护效果较好的重组蛋白疫苗，大大提高了斜带石斑鱼的抗病成活率。本发明也旨在解决刺激隐核虫疫苗制备成本较高且免疫保护效果不佳的技术问题，提供了一种基于刺激隐核虫膜蛋白CiIA2的亚单位疫苗制备方法，首次筛选鉴定出刺激隐核虫的CiIA2膜蛋白，并对其进行优化重组表达，以其作为抗原制备疫苗，大大提高了石斑鱼的抗刺激隐核虫感染的能力。
一种提高石斑鱼成活率养殖方法

[发明专利]一种提高卵形鲳鲹成活率的养殖方法-CN202211408666.1在审
发明人：莫泽权;吴辉城;李雄;洪宇豪;郭文杰;王凯旸;李言伟;但学明 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2022-11-02 - 公布日： 2023-04-04 - 主分类号： A61K39/002 文献下载
摘要：本发明旨在解决卵形鲳鲹养殖过程中感染刺激隐核虫后死亡率高的问题，提供一种提高卵形鲳鲹成活率的养殖方法，在卵形鲳鲹养殖过程中，前期注射磷酸锰胶体，后期注射锰胶体佐剂疫苗，大大提高了卵形鲳鲹的抗病成活率。本发明也旨在解决刺激隐核虫疫苗免疫保护效果不佳的技术问题，在卵形鲳鲹养殖前期注射磷酸锰胶体，先初步激活卵形鲳鲹的免疫系统，再在卵形鲳鲹养殖后期注射锰胶体佐剂刺激隐核虫疫苗，进一步加强激活卵形鲳鲹的免疫系统，使得卵形鲳鲹对刺激隐核虫的抵抗力达到最佳，解决了单用普通刺激隐核虫疫苗而免疫保护率低的问题。
一种提高卵形成活率养殖方法

[发明专利]一种检测对虾肝胰腺坏死性细菌的实时荧光定量检测试剂盒-CN202210743373.2在审
发明人：张璜;但学明;林雪金;高金艳;田驰;王坤;余嘉明 -专利权人：连云港旋达生物科技有限公司
申请日： 2022-06-27 - 公布日： 2022-10-21 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测对虾肝胰腺坏死性细菌的实时荧光定量检测试剂盒。该试剂盒包含一组检测对虾肝胰腺坏死性细菌的引物组和一组检测对虾属内参基因的引物组，所述两组引物组均包括一对特异性引物及对应的TaqMan探针，试剂盒还包括DNA聚合酶，UNG酶，2×反应缓冲液，密封液，阳性对照参考品和阴性对照参考品。本发明提供的一管式分装试剂盒可直接从复杂样品中检测对虾肝胰腺坏死性细菌，具有特异性强、灵敏度高、实验重复性好、操作便捷快速的优点，不需要昂贵的仪器即可完成检测，并且内参基因可以全程监控检测过程，有效提示假阴性的现象出现。可用于对虾肝胰腺坏死性细菌的快速、准确检测。
一种检测对虾胰腺死性细菌实时荧光定量试剂盒

[发明专利]一种基于嗜热四膜虫tubulin蛋白的刺激隐核虫疫苗的制备方法-CN202210249011.8在审
发明人：李言伟;但学明;莫泽权;吴辉城;胡颖彤 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2022-03-09 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： A61K39/002 文献下载
摘要：本发明旨在解决激隐核虫疫苗制备成本较高且免疫保护效果不佳的技术问题，提供了一种基于嗜热四膜虫tubulin蛋白的刺激隐核虫疫苗的制备方法，首次鉴定出四膜虫中的交叉保护性抗原tubulin蛋白，并在大肠杆菌中对tubulin基因进行重组表达，以其作为抗原制备疫苗，大大提高了石斑鱼抗刺激隐核虫感染的能力。其免疫保护效果远高于利用四膜虫全虫蛋白或纤毛蛋白制备的异源疫苗。
一种基于四膜虫 tubulin 蛋白刺激隐核虫疫苗制备方法

[发明专利]一种蔗糖悬浮法计数刺激隐核虫包囊的方法-CN201911272625.2有效
发明人：李言伟;但学明;王久乐;莫泽权;何智昌 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2019-12-04 - 公布日： 2021-10-29 - 主分类号： A01K61/13 文献下载
摘要：本发明首次采用蔗糖悬浮法对刺激隐核虫包囊进行计数，不仅操作简单、使用方便，而且计数结果准确可靠，大大方便了鱼类刺激隐核虫病的免疫研究。通过向包囊烧杯中添加质量分数为37.5％的蔗糖溶液，搅匀后用移液枪从烧杯中取出20份1ml的蔗糖溶液，最终计算出包囊总量。
一种蔗糖悬浮计数刺激隐核虫包囊方法

[发明专利]一种刺激隐核虫亚单位疫苗的制备方法及其应用-CN201710505968.3有效
发明人： 但学明;李言伟;莫泽权 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2017-06-20 - 公布日： 2021-05-04 - 主分类号： A61K39/002 文献下载
摘要：本申请涉及一种刺激隐核虫亚单位疫苗的制备方法及其应用。刺激隐核虫全虫疫苗的批文申请和产业化遇到巨大挑战，主要因为该寄生虫无法进行离体培养，必须在鱼体上才能进行繁殖，因而难以获得足够的虫体用以生产疫苗，更为重要的是难以制订规范的生产流程和质量标准，这迫使我们向更深层次进行研究，开发基因工程疫苗。本发明从刺激隐核虫转录组数据库中筛选出表面蛋白C1候选基因，并在四膜虫上表达出重组蛋白制备疫苗用以免疫海水鱼，通过检测疫苗的免疫原性和保护性，筛选到刺激隐核虫有效的保护性抗原基因。
一种刺激隐核虫亚单位疫苗制备方法及其应用

[发明专利]一种斜带石斑鱼CCR12的多克隆抗体制备方法及其应用-CN201710333721.8有效
发明人： 但学明;李言伟;周玲 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2017-05-04 - 公布日： 2020-12-11 - 主分类号： C07K16/28 文献下载
摘要：一种斜带石斑鱼CCR12的多克隆抗体制备方法及其应用。目前在鱼中发现了3种XCR1样趋化因子受体，即XCR1、XCR1L和CCR12，其中XCR1L和CCR12只在鱼类基因组中发现，但关于其功能研究甚少，截止目前，尚未有关于鱼类CCR12体外表达的任何报道，尚未有人制备过斜带石斑鱼的CCR12多克隆抗体，关于CCR12多克隆抗体的应用更无任何报道。为进一步揭示石斑鱼CCR12阳性细胞在寄生虫感染组织中的迁移或增殖情况，鉴定CCR12阳性细胞类型，本研究首次通过原核系统表达纯化了CCR12的N‑端区和3个胞外区重组蛋白，并最终首次制备了兔抗CCR12重组蛋白多克隆抗体，该抗体能特异性识别石斑鱼CCR12蛋白，且标记血液中的细胞，为我们今后标记CCR12阳性细胞并开展其抗寄生虫感染研究奠定基础。
一种石斑鱼 ccr12 克隆抗体制备方法及其应用

[发明专利]一种能够识别斜带石斑鱼两种IgM重链的单克隆抗体的制备方法-CN202010558182.X在审
发明人：李言伟;但学明;赖学礼;莫泽权 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2020-06-11 - 公布日： 2020-10-09 - 主分类号： C07K16/42 文献下载
摘要：本发明旨在解决斜带石斑鱼两种IgM重链同时识别难的问题，提供了一种能够识别斜带石斑鱼两种IgM重链的单克隆抗体的制备方法，通过构建独特的IgM原核表达载体，表达纯化了IgM重组蛋白，制备的单抗能同时识别斜带石斑鱼血清中两条条带80kDa和50kDa，该单抗能够有效标记斜带石斑鱼头肾切片中的B细胞，为进一步研究斜带石斑鱼两种IgM重链的功能打下了基础。
一种能够识别石斑鱼 igm 单克隆抗体制备方法

[发明专利]一种斜带石斑鱼CCR12的基因克隆和原核表达、纯化方法-CN201710333645.0有效
发明人： 但学明;李言伟;周玲 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2017-05-04 - 公布日： 2020-07-14 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：目前在鱼中发现了3种XCR1样趋化因子受体，即XCR1、XCR1L和CCR12，其中XCR1L和CCR12只在鱼类基因组中发现，但关于其功能研究甚少，截止目前，尚未有关于鱼类CCR12体外表达的任何报道。为进一步揭示石斑鱼CCR12阳性细胞在寄生虫感染组织中的迁移或增殖情况，本研究首次构建了斜带石斑鱼CCR12的N‑端区和3个胞外区的重组表达载体，通过原核系统表达了CCR12的重组蛋白，为今后石斑鱼CCR12的体外研究奠定了基础。
一种石斑鱼 ccr12 基因克隆表达纯化方法

[发明专利]一种刺激隐核虫局部感染斜带石斑鱼皮肤的免疫模型构建方法-CN201810345955.9有效
发明人：李言伟;但学明;莫泽权 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2018-04-09 - 公布日： 2020-01-03 - 主分类号： A01K61/10 文献下载
摘要：本发明首次采用刺激隐核虫局部感染斜带石斑鱼单侧皮肤的方式来进行免疫，采用最优化的感染浓度和感染时长，首次构建了刺激隐核虫局部感染斜带石斑鱼皮肤的免疫模型，彻底消除了鱼类局部皮肤黏膜免疫应答过程中“先天性差异”所带来的负面影响，为研究局部黏膜免疫应答规律提供了理想的免疫模型。本发明免疫模型的构建方法主要包括5个歩骤：(1)刺激隐核虫活幼虫的收集和浓度计算；(2)斜带石斑鱼的分组和驯养；(3)局部皮肤免疫；(4)感染强度的测定；(5)局部感染后鱼体的处理。
刺激隐核虫斜带石斑鱼局部感染免疫模型构建局部皮肤皮肤感染先天性差异负面影响局部黏膜免疫应答浓度计算应答过程黏膜免疫最优化幼虫时长鱼体驯养鱼类分组研究

[发明专利]一种刺激隐核虫局部感染斜带石斑鱼鳃组织的免疫模型构建方法-CN201810346051.8有效
发明人：李言伟;但学明;莫泽权 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2018-04-09 - 公布日： 2019-09-20 - 主分类号： A01K61/10 文献下载
摘要：本发明首次采用刺激隐核虫局部感染斜带石斑鱼单侧鳃的方式来进行免疫，采用最优化的感染浓度和感染时长，首次构建了刺激隐核虫局部感染斜带石斑鱼鳃组织的免疫模型，彻底消除了鱼类局部鳃组织黏膜免疫应答过程中“先天性差异”所带来的负面影响，为研究局部黏膜免疫应答规律提供了理想的免疫模型。本发明免疫模型的构建方法主要包括5个歩骤：(1)刺激隐核虫活幼虫的收集和浓度计算；(2)斜带石斑鱼的分组和驯养；(3)局部鳃组织免疫；(4)感染强度的测定；(5)局部感染后鱼体的处理。
刺激隐核虫斜带石斑鱼局部感染免疫模型鳃组织构建感染先天性差异负面影响局部黏膜免疫应答浓度计算应答过程黏膜免疫最优化幼虫时长鱼体驯养鱼类分组研究

[发明专利]一种刺激隐核虫表面蛋白C1多克隆抗体的制备方法及其应用-CN201710505967.9在审
发明人：李言伟;但学明;莫泽权 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2017-06-20 - 公布日： 2017-09-05 - 主分类号： C07K16/20 文献下载
摘要：经我们研究发现，刺激隐核虫的表面蛋白C1基因是潜在有效的保护性抗原基因，本发明构建了四膜虫rDNA表达载体，对刺激隐核虫表面蛋白C1基因进行了体外表达、并分离纯化了重组蛋白，最终制备了表面蛋白C1的多克隆抗体，并对其在免疫组化方面进行了初步应用。
一种刺激隐核虫表面蛋白 c1 克隆抗体制备方法及其应用

[发明专利]一种抗刺激隐核虫紫红笛鲷苗种的生产方法-CN201610236551.7在审
发明人： 但学明;李安兴;李言伟;莫泽权 -专利权人：华南农业大学;中山大学
申请日： 2016-04-08 - 公布日： 2016-10-12 - 主分类号： A01K61/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种抗刺激隐核虫紫红笛鲷苗种的生产方法，属于抗病性鱼苗生产领域，具体为抗刺激隐核虫鱼苗生产领域。首次采用变温感染和变温养殖的方式来生产抗病性的紫红笛鲷苗种，感染时的水温与感染后10天内的养殖水温保持一定温差，从而增强刺激隐核虫活幼虫的免疫效果，进而与轮换养殖结合，获得了有效免疫保护期较长的抗刺激隐核虫紫红笛鲷苗种，免疫后第8个月还具有68％的相对保护率，第9个月仍有40％的相对保护率。
一种刺激隐核虫紫红苗种生产方法

[发明专利]一种抗刺激隐核虫斜带石斑鱼苗种的生产方法-CN201610236552.1在审
发明人： 但学明;李安兴;李言伟;莫泽权 -专利权人：华南农业大学;中山大学
申请日： 2016-04-08 - 公布日： 2016-10-12 - 主分类号： A01K61/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种抗刺激隐核虫斜带石斑鱼苗种的生产方法，属于抗病性鱼苗生产领域，具体为抗刺激隐核虫鱼苗生产领域。首次采用变温感染和变温养殖的方式来生产抗病性的斜带石斑鱼苗种，感染时的水温与感染后10天内的养殖水温保持一定温差，从而增强刺激隐核虫活幼虫的免疫效果，进而与轮换养殖结合，获得了有效免疫保护期较长的抗刺激隐核虫斜带石斑鱼苗种，免疫后第8个月还具有60％的相对保护率，第9个月仍有34％的相对保护率。
一种刺激隐核虫斜带石斑鱼苗种生产方法

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