本发明公开了鞘磷脂酶突变体及其在sdLDL胆固醇检测中的应用，属于脂类含量检测技术领域。具体涉及五种鞘磷脂酶突变体：鞘磷脂酶突变体D118Q，鞘磷脂酶突变体N122D，鞘磷脂酶突变体N333E，鞘磷脂酶突变体Q376Y，鞘磷脂酶突变体MUT，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:2～6所示所述鞘磷脂酶突变体在sdLDL胆固醇检测中的应用。本发明还公开了五种鞘磷脂酶突变体的编码基因，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:8～12所示。本发明的五种鞘磷脂酶突变体，与野生型鞘磷脂酶相比，活性更高，提高了2～3倍，用于sdLDL胆固醇检测时，所使用的活力单位更少，效率更高。
本发明提供热稳定胆固醇酯酶突变体OPE‑A355E/T383E及其制备方法，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO本发明利用FoldX等软件，结合热稳定胆固醇酯酶突变体自由能的变化值，构建突变体电子文库；利用YASARA等软件分析淘汰结构不合理的突变体；对具有盐桥效应的突变体，利用生物信息学软件分析其相对溶剂表面积、形成盐桥的氨基酸残基之间的间隔距离等，筛选符合要求的突变体，组成微型突变电子文库。利用上述方法构建热稳定性胆固醇酯酶突变体，阳性突变体频率高达52.4%，有效降低筛选工作量；获得的突变体的半衰期延长10.5倍。
本发明提供热稳定胆固醇酯酶突变体OPE‑S109P/S271P及其制备方法，所述突变体序列如SEQ ID NO.1所示本发明利用软件，结合突变体自由能的变化值，构建突变体电子文库；从结构合理的突变体中，筛选出突变位点位于β‑转角的突变体，进行分析：组成β‑转角氨基酸残基z_B‑factor的平均值大于零；组成β‑转角氨基酸残基满足上述两个条件的突变体组成微型突变文库。利用上述方法构建所述突变体，阳性突变体频率为33.3%，有效降低筛选工作量；获得突变体的失活半衰期较野生型OPE延长了3.6倍。
