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[发明专利]使从动物粪便纯化的球虫卵囊形成孢子的方法、用该方法获得的孢子化卵囊和含有这些孢子化卵囊的疫苗-CN201580016249.4有效
发明人： T.P.M.舍特斯;K.格维斯 -专利权人：英特维特国际股份有限公司
申请日： 2015-04-02 - 公布日： 2020-04-21 - 主分类号： C12N3/00 文献下载
摘要：本发明涉及使从动物粪便(5)纯化的球虫卵囊形成孢子的方法，所述方法包括提供纯化的卵囊作为支持表面(22)上的层(40)，将所述层至少间歇地维持于具有至少15％的相对湿度的含氧气体环境(60)中，并将所述卵囊的温度维持于本发明还涉及用该方法获得的孢子化卵囊并涉及含有此类孢子化卵囊的疫苗。
动物粪便纯化虫卵形成孢子方法获得化卵囊含有这些疫苗

[发明专利]可调式超静增氧机在球虫卵囊孢子化发育中的应用-CN200910042344.8有效
发明人：谭志坚;翁亚彪 -专利权人：佛山市正典生物技术有限公司
申请日： 2009-09-01 - 公布日： 2010-03-03 - 主分类号： C12N3/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种可调式超静增氧机在球虫卵囊孢子化发育中的应用，其特征在于：它是从增氧机引出气管到球虫卵囊培养容器底部，给卵囊孢子化发育培养输送氧气，从而提高球虫卵囊培养液的含氧量，满足球虫卵囊孢子发育的需要本发明使用可调式超静增氧机应用于球虫卵囊孢子化发育培养中，可使球虫卵囊孢子化率高达90％，且卵囊形态、活力未受影响，效果大大优于传统的人工吹气增氧法。
调式增氧机虫卵孢子发育中的应用

[发明专利]球虫卵囊的分离纯化及子孢子制备方法-CN200610050193.7无效
发明人：杜爱芳;高翔 -专利权人：浙江大学
申请日： 2006-04-04 - 公布日： 2006-09-27 - 主分类号： C12N1/10 文献下载
摘要：一种球虫卵囊分离、纯化及子孢子制备方法，经常规处理鸡盲肠、内容物或粪便，获得卵囊的粗分离物，加2.5％重铬酸钾，放入培养箱孢子化培养2～4天，取孢子化卵囊储备悬液，离心洗涤，除去重铬酸钾，加入30％NaClO溶液，离心，取上清中白色漂浮物，加入蒸馏水混匀，离心弃上清，再用蒸馏水离心洗涤沉淀，除去NaClO和其它的有机物质，保留沉淀物，将纯化处理后的孢子化卵囊沉淀物用生理盐水悬浮后移入组织匀浆器内，研磨15－20分钟，显微镜镜检90％以上子孢子囊破碎即可。本发明方法设计合理，与传统分离制备方法相比，具有(1)操作简便、快捷，(2)提取的卵囊纯度高、杂质少；(3)子孢子活性高等优点。
虫卵分离纯化孢子制备方法

[发明专利]一种鸡艾美耳球虫卵囊分离纯化的工业化生产方法-CN201410082352.6无效
发明人：吴彩艳;孙铭飞;戚南山;廖申权;吕敏娜;李娟;谢明权;温列娜 -专利权人：广东省农业科学院动物卫生研究所
申请日： 2014-03-07 - 公布日： 2014-06-25 - 主分类号： C12N1/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种鸡艾美耳球虫卵囊分离纯化的工业化生产方法。该方法通过采用碟片分离机和管式离心机的科学组合，对鸡艾美耳球虫卵囊进行分离纯化，孢子化卵囊纯化后，无较大杂质，且无极微小的杂质。玻片镜检极其干净，未孢子化卵囊也全部剔除干净，视野中均为孢子化卵囊，溶液背景清晰。本发明方法缩短了卵囊分离纯化时间，与传统技术相比，节省时间70%以上；整个卵囊纯化避免太多人为工作的干扰，减少了过多人为因素造成产品的不稳定，是目前球虫疫苗生产方法的突破；本方法只需两台离心机，便可连续生产
一种鸡艾美耳球虫卵分离纯化工业化生产方法

[发明专利]一种鸡球虫疫苗的制备方法-CN200710055622.4无效
发明人：赵权;刘春杰 -专利权人：吉林农业大学
申请日： 2007-04-30 - 公布日： 2007-10-03 - 主分类号： A61K39/012 文献下载
摘要：本发明涉及一种鸡球虫疫苗的制备方法，其特征在于：具体的步骤为首先进行卵囊孢子化，扩增鸡球虫卵囊，将分离出的卵囊放入置重铬酸钾溶液的培养皿中，当有90％以上的卵囊完成孢子化时，停止培养，置于4℃冰箱储存备用；其次进行超声波致弱卵囊，将以上收集的孢子化卵囊加蒸馏水离心除去重铬酸钾溶液后，置于100ml小烧杯中，计数后再将小烧杯放入装有碎冰块的1000ml大烧杯进行冰浴后，置于超声波仪进行致弱。
一种鸡球虫疫苗制备方法

[发明专利]一种加快鸡球虫卵囊在体内脱囊的组合物及其制备方法-CN201610039971.6有效
发明人：陈庆忠;安同伟;曹桂敏 -专利权人：天津赫莱恩特生物科技有限公司
申请日： 2016-01-20 - 公布日： 2020-07-03 - 主分类号： A61K39/39 文献下载
摘要：本发明涉及一种加快鸡球虫卵囊在体内脱囊的组合物及其制备方法，该组合物的组分及其重量份数比为：麦饭石10‑40份；微晶纤维素10‑40份；碳酸氢钠10‑20份；无水硫酸镁5‑10份；富马酸10‑30份。本发明配方组成科学合理，工艺简单，使用方便，成本较低，快速加快孢子化卵囊迅速脱囊释放出子孢子，使子孢子快速进入肠上皮细胞进行裂殖生殖和有性生殖，减少裂殖生殖次数，同时降低裂殖生殖阶段对上皮细胞的破坏，增加孢子化卵囊中的子孢子和机体细胞的结合，减少疫苗中孢子化卵囊在鸡体内的排出量，提高球虫疫苗对整个鸡群的保护率。
一种加快虫卵体内组合及其制备方法

[发明专利]鸡毒害艾美耳球虫孢子化卵囊特异性扩增引物SP4124及其PCR检测方法-CN201910609216.0有效
发明人：赵光辉;宋军科;王一;王钰鑫;李媛 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2019-07-08 - 公布日： 2022-04-22 - 主分类号： C12Q1/6893 文献下载
摘要：本发明为一种鸡毒害艾美耳球虫孢子化卵囊的特异性扩增引物及其PCR检测方法，其设计特异性引物并建立用于检测毒害艾美耳球虫孢子化卵囊的特异性PCR检测方法，为鸡毒害艾美耳球虫的临床检测应用和推广提供理论依据和技术支撑特异性引物在检测鸡毒害艾美耳球虫孢子化卵囊中的PCR检测方法为：首先富集纯化待测样本中的卵囊，提取卵囊总RNA并通过反转录得到cDNA，然后以上述cDNA为模板，用特异性引物进行PCR扩增并对扩增产物进行电泳检测，若电泳结果出现444bp的特异条带，提示待测样本中存在毒害艾美耳球虫孢子化卵囊。
毒害艾美耳球虫孢子化卵囊特异性扩增引物 sp4124 及其 pcr 检测方法

[发明专利]使用受控剪切力从卵囊中释放孢子被的方法-CN200880004548.6有效
发明人：詹姆斯·E·哈钦斯;克里安妮·威尔逊;安杰拉·哈特曼;凯利·M·哈里斯 -专利权人：恩布里克斯公司
申请日： 2008-01-29 - 公布日： 2010-01-06 - 主分类号： A61K39/42 文献下载
摘要：本发明提供了从卵囊中释放孢子被/孢子体的方法，其中使卵囊溶液经受足以使卵囊壁破裂的受控剪切力，并从中释放孢子被/孢子体。在腔室直径、腔室几何规格和压力受到限定的条件下，使卵囊溶液通过微射流均质机处理器腔室单元。卵囊撞击腔室壁，并经受受控高剪切力，撕开卵囊壁并释放完整的孢子被/孢子体。
使用受控剪切囊中释放孢子方法

[发明专利]一种艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的制备方法-CN201910676954.7在审
发明人：陶建平;王乐乐;刘丹丹;苏丁泽阳;高阳;候照峰;宿世杰;许金俊 -专利权人：扬州大学
申请日： 2019-07-25 - 公布日： 2019-11-22 - 主分类号： C12N1/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的制备方法。通过0.5 M蔗糖卵囊壁破碎液和1.1 M蔗糖分离液的梯度离心，将卵囊壁从卵囊破碎液中分离纯化。实验证明，采用本方法可实现快速分离纯化艾美耳球虫未孢子化卵囊壁，回收量是传统方法的2倍以上，且纯度高，卵囊壁蛋白结构完整；另外，本方法还具有试剂配制方法简单，操作步骤简单方便等优点，对开展艾美耳球虫的研究实验具有重要价值和很强的实用性
卵囊壁耳球孢子化卵囊蔗糖破碎液蛋白结构分离纯化快速分离试剂配制梯度离心分离液回收量卵囊制备研究

[发明专利]一种提高荧光艾美耳球虫卵囊分选成功率的方法和应用-CN202110722267.1有效
发明人：蔡晓懿;林瑞庆;王新秋;刘丽丹;谭志坚 -专利权人：佛山市正典生物技术有限公司
申请日： 2021-06-28 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N1/11 文献下载
摘要：本发明属于球虫技术领域，公开了一种提高荧光艾美耳球虫卵囊分选成功率的方法和应用，该方法包括以下步骤：将含有转基因艾美耳球虫卵囊的粪便进行球虫分离，得到球虫卵囊液A；将球虫卵囊液A进行孢子化，计数，稀释，得到卵囊液B；将卵囊液B静置，加入饱和食盐水，吹打，静置，取漂浮的卵囊加入水，离心后取沉淀，稀释，再进行单卵囊分离，得到目标卵囊；将目标卵囊经口感染SPF鸡进行传代，即得。本发明通过对含有转基因艾美耳球虫卵囊进行球虫分离，再进行孢子化，加入饱和食盐水，吹打后卵囊浮起，静置后收集卵囊，再通过单卵囊分离技术，经口感染SPF鸡进行传代，传代后的卵囊含荧光率增加到50％。
一种提高荧光艾美耳球虫卵分选成功率方法应用

[发明专利]柔嫩艾美耳球虫子孢子的分离纯化方法和接种方法-CN202110227960.1在审
发明人：林瑞庆;周德荣;陆肖;蔡晓懿;方园婷;蒋嘉豪;孟甜;王瑞珍;翁亚彪 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2021-03-02 - 公布日： 2021-06-01 - 主分类号： C12N1/10 文献下载
摘要：本发明提供一种柔嫩艾美耳球虫子孢子的分离纯化方法和接种方法，涉及生物技术领域。本发明的分离纯化方法包括：取感染鸡粪便，加水，过滤；离心，沉淀加入饱和食盐水，离心，上清液加水得卵囊稀释液；离心，沉淀加入氯胺T溶液，得孢子化卵囊悬液；离心，沉淀加入饱和食盐水重悬，离心收集卵囊沉淀；加入次氯酸钠溶液重悬，收集卵囊；震荡破碎，待孢子囊全部逸出停止震荡，离心得到孢子囊，加入胰酶消化液进行消化，过滤离心收集沉淀，得柔嫩艾美耳球虫子孢子。本发明的接种方法是将上述孢子囊或子孢子精准注射于小鸡肌胃和小肠中段，实现成功感染。本发明的纯化方法得到的孢子囊和子孢子的纯化程度高，实验操作简便，注射接种后感染成功率达100％。
柔嫩艾美耳球虫子孢子分离纯化方法接种

[发明专利]一种提高球虫卵囊孢子化率的组合物及其制备方法-CN201610039890.6在审
发明人：陈庆忠;安同伟;曹桂敏 -专利权人：天津赫莱恩特生物科技有限公司
申请日： 2016-01-20 - 公布日： 2017-07-28 - 主分类号： A61K33/14 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高球虫卵囊孢子化率的组合物及其制备方法，该组合物的组分及其重量百分比为葡萄糖10-30份；氨基酸10-40份；氯化钠5-10份；氯化钾5-10份；酵母细胞壁甘露聚糖10-30份。本发明配方组成科学合理，工艺简单，使用方便，成本较低，通过钾、钠离子平衡保持卵囊的完整性、葡萄糖补充卵囊因孢子化过程中减数分裂消耗大量的能量和氧气；氨基酸能加速子孢子与残体的脱离；酵母细胞壁甘露聚糖维持卵囊壁的完整性减少卵囊在振荡器中破裂
一种提高虫卵孢子组合及其制备方法

[发明专利]一种鸡毒害艾美耳球虫孢子化卵囊的特异性引物SP2908及PCR检测方法-CN201910432125.4有效
发明人：赵光辉;宋军科;王一;董和平;王钰鑫;李媛 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2019-05-23 - 公布日： 2022-04-22 - 主分类号： C12Q1/6893 文献下载
摘要：本发明为一种鸡毒害艾美耳球虫孢子化卵囊的特异性引物及PCR检测方法，其设计特异性引物并建立用于检测毒害艾美耳球虫孢子化卵囊的特异性PCR检测方法，为鸡毒害艾美耳球虫的临床检测应用和推广提供理论依据和技术支撑特异性引物在检测鸡毒害艾美耳球虫孢子化卵囊中的PCR检测方法为：以待测样本的cDNA为模板，以特异性引物作为扩增引物进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，若电泳结果出现286bp目的条带，则待测样本为毒害艾美耳球虫孢子化卵囊
一种毒害艾美耳球虫孢子化卵囊特异性引物 sp2908 pcr 检测方法

[发明专利]一种提高鸡艾美尔球虫卵囊孢子化效率的方法及其应用-CN201711495787.3在审
发明人：安同伟;史晓华;赵金羽 -专利权人：天津赫莱恩特生物科技有限公司
申请日： 2017-12-31 - 公布日： 2018-06-01 - 主分类号： C12N1/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高鸡艾美尔球虫卵囊孢子化效率的新方法，具体涉及一种通过控制卵囊浓度、液面高度和氧气浓度来提高的鸡艾美尔球虫卵囊孢子化效率的方法，该方法能够大大提高鸡艾美尔球虫卵囊孢子化的效率，降低人力物力投入
球虫卵囊孢子化人力物力生产效率卵囊液面氧气应用

[发明专利]一种扩繁艾美耳球虫的方法-CN202210649265.9在审
发明人：谭志坚;孟甜;林瑞庆;周德荣;翁亚彪;刘丽丹;王新秋;朱叶;曾莉 -专利权人：佛山市正典生物技术有限公司
申请日： 2022-06-09 - 公布日： 2022-08-12 - 主分类号： C12N1/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种扩繁艾美耳球虫的方法，所述方法包括：将艾美耳球虫卵囊接种于鸡的十二指肠，对接种后鸡进行培养，扩繁艾美耳球虫，收集粪便，获取粪便中的艾美耳球虫卵囊。本发明将艾美耳球虫孢子化卵囊在体外通过机械法研磨的方式使孢子囊释出，将孢子囊接种到鸡十二指肠，接种后感染成功率100％，对于不能经肌胃研磨的鸡球虫结构，如孢子囊，通过注射方式接种到十二指肠，孢子囊在胆汁和胰酶的作用下释放出子孢子，子孢子感染鸡后在体内完成裂殖生殖和孢子生殖，产生后代卵囊。
一种扩繁艾美耳球虫方法

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