本发明公开了编码β-半乳糖苷酶的基因及其表达和应用。本发明从采自新疆的土壤中筛选克隆了一个来源于纤维单胞菌属(Cellulomonassp.)的β-半乳糖苷酶新基因(SEQ ID NO:1)。该β-半乳糖苷酶基因组DNA全长2076bp,(G+C)%含量72.9%,推导其编码692个氨基酸。该基因所编码的β-半乳糖苷酶与来源于节杆菌属的β-半乳糖苷酶相似性最高,为59%。酶学性质测定表明,本发明β-半乳糖苷酶为中性常温酶。文献报道的其他节杆菌属(Arthrobacter sp.)的β-半乳糖苷酶大多属低温适冷酶,在酶学性质上与本发明的β-半乳糖苷酶存在着显著差异。