[发明专利]从蛇毒中分离纯化神经生长因子的方法无效
申请号: | 92109961.4 | 申请日: | 1992-09-29 |
公开(公告)号: | CN1074448A | 公开(公告)日: | 1993-07-21 |
发明(设计)人: | 潘清;郝文学;郝小菁 | 申请(专利权)人: | 中国医科大学 |
主分类号: | C07K3/12 | 分类号: | C07K3/12;C07K15/08;A61K35/58;A61K37/36 |
代理公司: | 沈阳市专利事务所 | 代理人: | 刁佩德,于丽影 |
地址: | 110001 辽*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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摘要: | 本发明提供一种从江浙蛇毒中分离纯化神经生长因子的方法。采用江浙蝮蛇毒经冻干成干粉,在4℃条件下完成下述步骤;(1)CM-ScphadcxC50柱层析;(2)ScphadcxG100凝胶过滤层析;(3)DEAE-ScphadcxA50层析;(4)高效液相色谱仪(FPLC)层析。该方法一次层析上样量大,分辨率高,有利于工业化生产,纯化的神经生长因子对酸、碱和温度有较好的稳定性。 | ||
搜索关键词: | 蛇毒 分离 纯化 神经 生长因子 方法 | ||
【主权项】:
1、一种从蛇毒中分离纯化神经生长因子的方法,其特征是采用江浙蝮蛇毒经冻干制成干粉,在4℃条件下完成以下四个层析步骤:(1)、CM-SephadexC50柱层析取江浙蝮蛇毒干粉溶解于PH6.4磷酸盐缓冲液中,离心除去不溶物,上清液上样于经上述缓冲液已平衡好的CM-Sep-hadexC50层析柱(2.6×50cm),起始缓冲液洗去未吸附的杂蛋白,再用0-1MNacl直线梯度洗脱,按峰分别收集,测各峰蛋白浓度,然后测NGF的生物活性,将具有NGF生物活性的组份,透析除盐,冷冻干燥;(2)、SephadexG100凝胶过滤层析将第一步层析的NGF样品溶于PH7.0磷酸盐缓冲液中,上SephadexG100层析柱(2.6×95cm),用同种缓冲液洗脱,按峰收集,测NGF的生物活性,将具有NGF生物活性的组份,透析除盐,冷冻干燥;(3)、DEAE-SephadexA50层析将SephadexG100具有NGF活性组份溶于Tris-Hcl,PH8.4缓冲液中,上样于DEAE-Sepha-dexA50层析柱(1.6×35cm),0-0.5MNacl直线梯度洗脱,按峰收集。测NGF生物活性,将具有NGF活性,透析除盐,冻干;(4)、高效液相色谱仪(FPLC)层析取DEAE-SephadexA50层析的NGF组份溶于Tris-hcl,PH8.0缓冲液中,上FPLCMonoQHR5/5阴离子交换柱,用Nacl浓度梯度洗脱,收集NGF活性,除盐、冻干,即得纯化的神经生长因子。
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