[发明专利]一种基于蛋白载体的茶多酚微纳米复合体的制备方法及用途

摘要

本发明公开了一种基于蛋白载体的茶多酚微纳米复合体的制备方法及用途，采用经多重物理诱导改性的食品蛋白为载体在特定条件下封装载运茶叶多酚，并结合壳聚糖构建三元复合稳态体系，进一步提高茶叶多酚的应用稳定性及抗氧化、抑菌等活性功效，与现有相关技术相比，多酚负载量及抑菌活性大幅提高。本发明能够作为多酚类成分包封、保护和递送系统实现茶叶酚类乃至植物多酚成分功效的高效发挥和稳态化应用，跨界应用于食品工业、日化产品、医药保健、防腐保鲜等多个领域。

主权项

1.一种基于蛋白载体的茶多酚微纳米复合体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）茶叶酚类溶液体系制备：将茶叶多酚溶于超纯水或磷酸盐缓冲液中超声处理至澄清透明，搅拌，制得浓度为2～10mg/mL的茶叶酚类溶液，4℃储存待用；2）蛋白溶液体系制备：以蛋白为基本运载模型，通过超声空化同步热诱导，pH多极性震荡变换处理对蛋白进行改性和结构重组，制得改性后蛋白，将改性后蛋白溶于PBS缓冲液中，于超声条件下进行分散处理制得浓度为2～20mg/mL的蛋白溶液体系，调节pH至8.0，储存待用；3）壳聚糖溶液体系制备：按料液比0.01～1.5g/50～100mL的比例，取壳聚糖溶于1%（v/v）乙酸水溶液，超声空化处理20min至澄清透明，搅拌，使其充分溶解至溶液透明，制得浓度1～30mg/mL壳聚糖溶液，调节pH至6.0，储存待用；4）CS‑TP‑CTS微纳米复合体制备：将步骤1）、步骤2）、步骤3）所得储备液在RCF 4000×g下离心10～20min，以进一步除去杂质和不溶物；将步骤1）制得的浓度为2～10mg/mL的茶叶多酚储备溶液使用注射器按1滴/秒的速度逐滴加入或使用微量恒流泵以10ml/min的速度滴加于150～800r/min搅拌状态下的蛋白储备溶液中，并于1h内滴加完毕，滴加完毕后的混合溶液在30℃，600 r/min密封条件下涡旋孵育10h，以形成CS‑TP溶液体系；涡旋过程中保证茶叶多酚储备液与CS蛋白储备液体积比为1:0.5～1:10之间，对应的TP与蛋白的质量比为1:0.1～1:10；涡旋完毕后，将步骤3）制得的壳聚糖储备溶液使用微量恒流泵滴加处于150～1000r/min搅拌状态下的CS‑TP溶液体系，以120～1200rpm 连续搅拌2～24h，以确保形成微纳米复合物，其中，壳聚糖储备液与CS‑TP溶液体系的体积比为1:1，制得CS‑TP‑CTS微纳米体系；或者将步骤2）制得的浓度为2～10mg/mL的蛋白储备溶液使用微量恒流泵以3滴每秒的速度滴加处于150～1000rpm搅拌状态下的CTS‑TP涡旋体系，在30℃下以120～1200r/min连续搅拌4～24 h，以形成CS‑TP‑CTS微纳米聚集体；保证蛋白储备液与CTS‑TP溶液体系的体积比为1:2；其中，CTS‑TP体系制备方法如下，取0.01～1.5g壳聚糖溶于50～100ml1%（v/v）乙酸水溶液中，800r/min搅拌1h使其充分溶解至溶液透明，于450W超声空化条件下处理10min，使溶液充分溶解，制得浓度1～30 mg/ml CTS溶液，再加入2～10mg/ml EGCG，800r/min搅拌1h使其充分溶解至溶液透明，450W超声空化条件下处理10min即得，也可达同样之效果；或者将步骤3）制得CTS溶液与步骤2）制得CS溶液等体积混合，持续搅拌1h，80℃水浴下800r/min搅拌1h；待溶液温度降低至室温后，将步骤1）制备得8mg/mlEGCG溶液按照体积比2:1（v/v）以每秒2滴速度滴加于混合反应液中，并于30min内滴加完毕；滴加过程中保持混合体系800r/min涡旋状态；避光条件下200 r/min搅拌2h，在50℃下热反应0.5h，然后以功率600w超声10min后即得，也可达同样之效果；5）反应底物及非目标物的脱除：采用透析法、离心法、膜过滤法中的一种或一种以上对反应底物及非目标物进行脱除，得混合反应体系；6）溶剂的脱除：将混合反应体系过膜通过0.22μm滤膜，以除去杂质和大分子非目标产物，所得溶液于25℃的条件下通过减压旋转蒸发脱除体系中相应溶剂，得到不透明单相溶液，通过离心分离出CS‑TP‑CTS微纳米体；7）干燥及贮存：在步骤6）制得的CS‑TP‑CTS中添加冷冻干燥保护剂吐温80后，于0.01Mpa，‑50℃的条件下冷冻干燥48 h至水分含量低于7%，得固态茶多酚微纳米复合体。