[发明专利]外源基因定点整合至GAPDH基因下游的打靶载体构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201910559340.0 | 申请日： | 2019-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN110305899A | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | 阮进学;韩晓松;赵书红;熊友才;庄荣志;赵长志;余梅;李新云;李长春;谢胜松;付亮亮;赵云霞 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;C12N15/113 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 江丽丽;王敏锋 |
| 地址： | 430074 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种将外源基因定点整合至猪GAPDH基因下游的打靶载体，所述打靶载体是以GAPDH基因终止密码子上下游序列作为左、右同源臂，将左同源臂、2A序列、外源基因序列和右同源臂依次连接起来，反向插入到真核表达载体的多克隆位点上。将该打靶载体与含特异性靶向猪GAPDH基因下游的sgRNA的CRISPR/Cas9切割载体共转染猪真核细胞中，可以将外源基因定点整合至GAPDH基因下游。本发明提供的这一打靶位点，可以拓宽外源基因在猪基因组中整合位点的范围，为制备外源基因在猪基因组中高效稳定的表达奠定基础。 | ||
| 搜索关键词： | 外源基因 打靶载体 定点整合 同源臂 猪基因组 位点 打靶载体构建 外源基因序列 真核表达载体 多克隆位点 特异性靶向 终止密码子 依次连接 真核细胞 共转染 整合 制备 切割 应用 | ||
【主权项】：
1.一种将外源基因定点整合至猪GAPDH基因下游的打靶载体，其特征在于，以GAPDH基因终止密码子上下游序列作为左、右同源臂，将左同源臂、2A序列、外源基因序列和右同源臂依次连接起来，反向插入到真核表达载体的多克隆位点上；所述的左同源臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，右同源臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
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