[发明专利]四溴双酚A的好氧降解菌的筛选方法和应用

摘要

本发明公开了四溴双酚A的好氧降解菌的筛选方法和应用，属于微生物技术领域。本发明四溴双酚A的好氧降解菌株的筛选方法，即驯化，强化，分离，纯化和富集方法：将活性污泥以四溴双酚A为唯一碳源和能源驯化，以四溴双酚A和2,6‑二溴苯酚强化；再将驯化强化后的液体涂布在以四溴双酚A为唯一碳源和能源的无机盐固体培养基上，分离纯化出具有降解四溴双酚A的单菌株；并将单菌株富集离心后接入以不同浓度的四溴双酚A为唯一碳源和能源的无机盐培养基中，了解其降解四溴双酚A的能力。本发明筛选的菌株可以在常规条件下以四溴双酚A为唯一碳源生长并降解去除四溴双酚A，无须添加其他能源，碳源，不产生二次污染；对四溴双酚A的毒性具有耐受性。

主权项

1.四溴双酚A的好氧降解菌株的筛选方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)将四溴双酚A溶于甲醇中配制成母液；(2)将步骤(1)的母液加入到无机盐液体培养基中配制成四溴双酚A‑无机盐液体培养基Ⅰ，以处理生活污水的活性污泥为菌源，接种至四溴双酚A‑无机盐液体培养基Ⅰ中，在温度为29～31℃条件下摇床培养6.5～7.5d得到培养液体系Ⅰ；(3)将步骤(1)的母液加入到无机盐液体培养基中配制成四溴双酚A‑无机盐液体培养基Ⅱ，将步骤(2)的培养液体系接种至四溴双酚A‑无机盐液体培养基Ⅱ中摇床培养一个周期得到培养液体系Ⅱ，然后将培养液体系Ⅱ接种至四溴双酚A‑无机盐液体培养基Ⅲ中摇床培养一个周期得到培养液体系Ⅲ，将培养液体系Ⅲ接种至四溴双酚A‑无机盐液体培养基Ⅳ摇床培养一个周期得到培养液体系Ⅳ，再将培养液体系Ⅳ接种至新的四溴双酚A‑无机盐液体培养基Ⅳ中摇床培养一个周期得到新的培养液体系Ⅳ，重复将培养液体系Ⅳ接种至新的四溴双酚A‑无机盐液体培养基Ⅳ中摇床培养至两个月得到驯化培养液；其中四溴双酚A‑无机盐液体培养基Ⅱ中四溴双酚A的浓度为40mg/L，四溴双酚A‑无机盐液体培养基Ⅲ中四溴双酚A的浓度为60mg/L，四溴双酚A‑无机盐液体培养基Ⅳ中四溴双酚A的浓度为80mg/L；(4)将步骤(3)的驯化培养液接种于四溴双酚A无机盐培养基液体a‑1中摇床培养一周得到a‑1培养体系，或将步骤(3)的驯化培养液接种于1‑溴苯酚无机盐培养基液体b‑1中摇床培养一周得到b‑1培养体系，或将步骤(3)的驯化培养液接种于2,6‑二溴苯酚无机盐培养基液体c‑1中摇床培养一周得到c‑1培养体系，或将步骤(3)的驯化培养液接种于四溴双酚A/1‑溴苯酚无机盐培养基液体d‑1中摇床培养一周得到d‑1培养体系，或将步骤(3)的驯化培养液接种于四溴双酚A/2,6‑二溴苯酚无机盐培养基液体e‑1中摇床培养一周得到e‑1培养体系；其中四溴双酚A无机盐培养基液体a‑1中四溴双酚A的浓度为20mg/L，1‑溴苯酚无机盐培养基液体b‑1中1‑溴苯酚无机盐浓度为20mg/L，2,6‑二溴苯酚无机盐培养基液体c‑1中2,6‑二溴苯酚无机盐浓度为20mg/L，四溴双酚A/1‑溴苯酚无机盐培养基液体d‑1中四溴双酚A的浓度为10mg/L、1‑溴苯酚无机盐的浓度为10mg/L，四溴双酚A/2,6‑二溴苯酚无机盐培养基液体e‑1中四溴双酚A的浓度为10mg/L、2,6‑二溴苯酚无机盐的浓度为10mg/L；(5)将a‑1培养体系接种至四溴双酚A无机盐培养基液体a‑2中摇床培养一周得到a‑2培养体系，将b‑1培养体系接种至1‑溴苯酚无机盐培养基液体b‑2中摇床培养一周得到b‑2培养体系，将c‑1培养体系接种至2,6‑二溴苯酚无机盐培养基液体c‑2中摇床培养一周得到c‑2培养体系，将d‑1培养体系接种至四溴双酚A/1‑溴苯酚无机盐培养基液体d‑2中摇床培养一周得到d‑2培养体系，将e‑1培养体系接种至四溴双酚A/2,6‑二溴苯酚无机盐培养基液体e‑2中摇床培养一周得到e‑2培养体系；其中四溴双酚A无机盐培养基液体a‑2中四溴双酚A的浓度为40mg/L，1‑溴苯酚无机盐培养基液体b‑2中1‑溴苯酚无机盐浓度为40mg/L，2,6‑二溴苯酚无机盐培养基液体c‑2中2,6‑二溴苯酚无机盐浓度为40mg/L，四溴双酚A/1‑溴苯酚无机盐培养基液体d‑2中四溴双酚A的浓度为20mg/L、1‑溴苯酚无机盐的浓度为20mg/L，四溴双酚A/2,6‑二溴苯酚无机盐培养基液体e‑2中四溴双酚A的浓度为20mg/L、2,6‑二溴苯酚无机盐的浓度为20mg/L；(6)将a‑2培养体系接种至四溴双酚A无机盐培养基液体a‑3中摇床培养一周得到a‑3驯化培养液，将b‑2培养体系接种至1‑溴苯酚无机盐培养基液体b‑3中摇床培养一周得到b‑3驯化培养液，将c‑2培养体系接种至2,6‑二溴苯酚无机盐培养基液体c‑3中摇床培养一周得到c‑3驯化培养液，将d‑2培养体系接种至四溴双酚A/1‑溴苯酚无机盐培养基液体d‑3中摇床培养一周得到d‑3驯化培养液，将e‑2培养体系接种至四溴双酚A/2,6‑二溴苯酚无机盐培养基液体e‑3中摇床培养一周得到e‑3驯化培养液；其中四溴双酚A无机盐培养基液体a‑3中四溴双酚A的浓度为60mg/L，1‑溴苯酚无机盐培养基液体b‑3中1‑溴苯酚无机盐浓度为60mg/L，2,6‑二溴苯酚无机盐培养基液体c‑3中2,6‑二溴苯酚无机盐浓度为60mg/L，四溴双酚A/1‑溴苯酚无机盐培养基液体d‑3中四溴双酚A的浓度为30mg/L、1‑溴苯酚无机盐的浓度为30mg/L，四溴双酚A/2,6‑二溴苯酚无机盐培养基液体e‑3中四溴双酚A的浓度为30mg/L、2,6‑二溴苯酚无机盐的浓度为30mg/L；(7)采用灭菌冷却的去离子水分别稀释步骤(6)的a‑3驯化培养液、b‑3驯化培养液、c‑3驯化培养液、d‑3驯化培养液或e‑3驯化培养液至10¹～10⁷倍，将稀释液涂布在以四溴双酚A为唯一碳源和能源的生长无机盐固体培养基上，在温度为29～31℃条件下恒温培养5天以上，挑选出形态颜色不同的菌株，分别划线纯化即得四溴双酚A的好氧降解菌株；将四溴双酚A的好氧降解菌株保存在温度为4℃的营养琼脂的固体斜面培养基上。